[发明专利]一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法

权利要求书

1.一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)乙醇溶液超声循环提取茄尼醇、烟碱和绿原酸：将烟叶进行烘干粉碎后，得烟叶碎片，并置于循环式超声提取器中，加入乙醇溶液，进行超声循环提取，过滤得乙醇提取液和烟叶滤渣，将乙醇提取液进行浓缩，得含茄尼醇、烟碱和绿原酸的粗膏；

(2)碱性水溶液超声循环提取蛋白质和糖：将步骤(1)得到的烟叶滤渣置于循环式超声提取器中，加入碱性水溶液，进行超声循环提取，过滤得含蛋白质和糖的提取液；

(3)茄尼醇、烟碱和绿原酸的分离：向含茄尼醇、烟碱和绿原酸的粗膏中加入石油醚和酸性水溶液，进行液-液两相萃取，取上层石油醚层进行浓缩得茄尼醇粗膏，再进行柱层析分离、重结晶得茄尼醇；下层水相用乙酸乙酯萃取后，取上层乙酸乙酯层进行浓缩得绿原酸粗膏，再配成绿原酸水溶液通过柱层析分离得绿原酸；将经乙酸乙酯萃取所得的下层水相进行浓缩，加入碱调节pH值，然后进行水蒸气蒸馏，用装有酸性水溶液的收集瓶收集馏分，得烟碱盐水溶液，将烟碱盐水溶液进行浓缩，加入碱调节pH值，然后用二氯甲烷进行萃取，取二氯甲烷层进行浓缩得烟碱；

(4)蛋白质和糖的分离：将步骤(2)中所得的含蛋白质和糖的提取液进行浓缩，加入蛋白质沉淀剂，静置后，离心分离上层清液和蛋白质沉淀，蛋白质沉淀用无水乙醇洗涤后，进行低温真空干燥，得所述蛋白质；上层清液加入乙醇进行醇沉，静置后进行过滤，得糖滤饼，将糖滤饼用无水乙醇洗涤后，进行低温真空干燥，得所述糖。

2.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤(1)中烟叶经烘干粉碎后所得烟叶碎片的尺寸为20目；所述乙醇溶液为乙醇体积分数为80～95％的酸性乙醇水溶液，pH值为3～4，pH值通过磷酸或柠檬酸进行调节。

3.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤(1)的乙醇溶液超声循环提取过程中，超声波功率为100～300W，超声提取温度为50～60℃，提取时间为30～60min；烟叶碎片与乙醇溶液的料液比为1:(5～20)，料液比单位为g/mL。

4.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)的碱性水溶液超声循环提取过程中，超声波功率为100～300W，超声提取温度为50～60℃，提取时间为30～60min；所述碱性水溶液为NaOH或KOH的碱性水溶液，pH值为7～8；烟叶滤渣与碱性水溶液的料液比为1:(10～20)，料液比单位为g/mL。

5.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述茄尼醇的分离步骤中，步骤(3)中液-液两相萃取所用酸性水溶液为磷酸水溶液，pH值为2～3，石油醚与酸性水溶液的体积比为2:3，萃取次数为2～3次；茄尼醇的柱层析分离所用吸附材料为100～200目的硅胶，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯混合溶剂，石油醚与乙酸乙酯的体积比为9:1；所述茄尼醇的重结晶溶剂为乙醇，重结晶温度为-15℃。

6.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述绿原酸的分离步骤中，柱层析分离采用聚酰胺柱作为层析分离柱，聚酰胺柱尺寸为80～100目，绿原酸水溶液的上样浓度为9mg/mL，上样量为5倍柱体积，上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为体积分数为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积。

7.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述烟碱的分离步骤包括：将步骤(3)中经乙酸乙酯萃取后的下层水相进行浓缩至初始体积的1/3，然后加入NaOH或KOH调节pH值至11～13；进行水蒸气蒸馏烟碱时用柠檬酸溶液吸收烟碱馏出液，并控制接收液pH小于3，当溜出液用质量分数为1％的硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏，然后将烟碱盐水溶液浓缩到原体积的1/3～1/2，加NaOH或KOH调节pH值至11～13，用二氯甲烷萃取1～2次，蒸发除去二氯甲烷即得烟碱。

8.根据权利要求1所述的一种从烟叶中综合提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤(4)中所得的含蛋白质和糖的提取液浓缩至初始体积的1/8～1/3；所述蛋白质沉淀剂为羧甲基壳聚糖，分子量为50000～100000，用量为0.01～0.05％wt；沉淀温度为4℃，时间为2～5h；所得蛋白质沉淀用无水乙醇洗涤2～3次；所得上层清液加入乙醇量为滤液体积的3～4倍；醇沉静置时间为1～2h，温度为4～20℃；所得糖滤饼用无水乙醇洗涤2～3次。