[发明专利]海南毒素‑IV类似物rHNIV‑01的表达载体及其制备方法

权利要求书

1.一种海南毒素-IV类似物rHNIV-01的表达载体，其特征在于，所述表达载体序列如SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述表达载体的制备方法，其特征在于，所述方法是以pET-43a载体为模板，用SEQ ID NO.5—10所示的引物进行无缝克隆：将编码GST序列替换pET-43a载体中的NusA序列，同时将编码SUMO序列插入编码GST序列的下游，再将编码rHNIV-01序列插入编码SUMO序列ULP1酶切割识别位点的下游，得PCR产物；将PCR产物经DpnI消化后转入大肠杆菌培养，提取质粒后经DNA测序验证正确，即得rHNIV-01的表达载体，命名为pWE-rHNIV-01，其序列如SEQ ID NO.4所示；其中所述编码GST序列如SEQ ID NO.1所示，编码SUMO序列如SEQ ID NO.2所示，编码rHNIV-01序列如SEQ ID NO.3所示。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌DH5α。

4.如权利要求1所述海南毒素-IV类似物rHNIV-01的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将权利要求1所述的表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)，然后将大肠杆菌培养后进行rHNIV-01融合蛋白的诱导表达；

(2)将经步骤(1)诱导表达后的大肠杆菌菌体悬浮后破碎并离心，将离心所得上清液经透析并再次离心后用ULP1激酶消化，得消化产物；

(3)向消化产物中加入质量百分比浓度为6—8％的TCA，抽提rHNIV-01融合蛋白，得到rHNIV-01融合蛋白溶液，经透析后冷干保存；

(4)将步骤(5)所得冻干保存的透析产物经RP-HPLC纯化后得纯化后的rHNIV-01。

5.用于制备权利要求1所述表达载体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SEQ ID NO.5—10所示的引物。