[发明专利]一种利用Ppd-B1基因甲基化选育小麦的方法

权利要求书

1.扩增SEQ ID No.10所示的DNA分子的引物。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的DNA分子。

3.一种鉴定或辅助鉴定小麦Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高低的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1或2所述的引物；

所述试剂盒还包含使用说明书，说明书中记载内容如下：以经过亚硫酸氢盐转化后的小麦基因组DNA为模板，以权利要求1或2所述的引物为引物进行PCR扩增,得到PCR扩增产物；将PCR扩增产物用BsrB I酶切，若酶切产物为312bp的单一条带，则待测小麦为甲基化低类型，若酶切产物为150bp和162bp两种带型，则待测小麦为甲基化高类型，若酶切产物为150bp、162bp和312bp三种带型，则待测小麦为甲基化杂合类型；

所述区域Ⅱ甲基化水平是指如下(1)-(3)任一所示的甲基化水平：

(1)区域Ⅱ的总甲基化水平，即CpG二核苷酸序列、CpHpG和CpHpH核苷酸序列的甲基化水平；

(2)区域Ⅱ的CpG二核苷酸序列的甲基化水平；

(3)区域Ⅱ的CpHpG核苷酸序列的甲基化水平；

所述区域Ⅱ是Ppd-B1基因的第-1250至第-939位，以Ppd-B1基因的翻译起始位点为第1位，-代表翻译起始位点上游方向。

4.一种鉴定或辅助鉴定待测小麦Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高低的方法，是以经过亚硫酸氢盐转化后的待测小麦基因组DNA为模板，以权利要求1或2所述的引物为引物进行PCR扩增,得到PCR扩增产物；将PCR扩增产物用BsrB I酶切，若酶切产物为312bp的单一条带，则待测小麦为甲基化低类型，若酶切产物为150bp和162bp两种带型，则待测小麦为甲基化高类型，若酶切产物为150bp、162bp和312bp三种带型，则待测小麦为甲基化杂合类型；

所述区域Ⅱ甲基化水平是指如下(1)-(3)任一所示的甲基化水平：

(1)区域Ⅱ的总甲基化水平，即CpG二核苷酸序列、CpHpG和CpHpH核苷酸序列的甲基化水平；

(2)区域Ⅱ的CpG二核苷酸序列的甲基化水平；

(3)区域Ⅱ的CpHpG核苷酸序列的甲基化水平；

所述区域Ⅱ是Ppd-B1基因的第-1250至第-939位，以Ppd-B1基因的翻译起始位点为第1位，-代表翻译起始位点上游方向；

所述BsrBI酶切识别序列包含Ppd-B1基因的第-1100位和-1099位的CpG位点，以Ppd-B1基因的翻译起始位点为第1位，-代表翻译起始位点上游方向。

所述酶切的条件具体为37℃，3h。

5.一种辅助比较小麦抽穗期早晚的方法，是根据小麦的Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高低进行比较的，如果A种小麦的Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高于B种小麦的Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平，那么A种小麦候选为抽穗期早于B种小麦的小麦；

所述区域Ⅱ甲基化水平是指如下(1)-(3)任一所示的甲基化水平：

(1)区域Ⅱ的总甲基化水平，即CpG二核苷酸序列、CpHpG和CpHpH核苷酸序列的甲基化水平；

(2)区域Ⅱ的CpG二核苷酸序列的甲基化水平；

(3)区域Ⅱ的CpHpG核苷酸序列的甲基化水平；

所述区域Ⅱ是Ppd-B1基因的第-1250至第-939位，以Ppd-B1基因的翻译起始位点为第1位，-代表翻译起始位点上游方向。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述小麦的Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高低的判断方法为权利要求4所述的方法；

所述甲基化水平高是指权利要求4中所述的甲基化高类型；

所述甲基化水平低是指权利要求4中所述的甲基化低类型。

7.权利要求1或2所述的引物、权利要求3所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定小麦Ppd-B1基因区域Ⅱ甲基化水平高低中的应用；

所述区域Ⅱ是Ppd-B1基因的第-1250至第-939位，以Ppd-B1基因的翻译起始位点为第1位，-代表翻译起始位点上游方向。

8.权利要求1或2所述的引物、权利要求3所述的试剂盒在辅助比较小麦抽穗期早晚或小麦选育中的应用。