[发明专利]细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及细黄链霉菌固体发酵领域，特别地，涉及一种细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法。

背景技术

链霉菌(Streptomycetaceae)是抗生素类物质的主要生产菌，在微生物产生的20000多种活性物质中，链霉菌占到60％以上，是一类作物有益菌。细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)作为链霉菌属(Streptomyces)内的一个种类，在自然栽培条件下，其自身代谢产物可有效地促进植物生长，可产生玉米素、激动素等有效活性成分，已广泛应用于果树、蔬菜等多种植物栽培中，并对蔬菜等作物具有明显的促生、抗病作用。

但是，土壤中自然生长的细黄链霉菌数量太少，无法发挥上述作用。而现有技术中细黄链霉菌固体发酵周期长、产孢量少，难以实现工业化生产。

发明内容

本发明目的在于提供一种细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法，以解决现有技术中细黄链霉菌增殖少、产孢子量少的技术问题。

为实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种细黄链霉菌固体发酵培养基，包括30～60重量份的玉米粉、10～20重量份的米糠、30～50重量份的沙土和30重量份的营养液；沙土由重量比为3～5∶1的细土和沙子组成。

进一步地，营养液为高氏一号培养液。

进一步地，由30～60重量份的玉米粉、10～20重量份的米糠、30～50重量份的沙土和30重量份的高氏一号培养液组成。

进一步地，由40重量份的玉米粉、10重量份的米糠、50重量份的沙土和30重量份的高氏一号培养液组成；沙土由重量比为4∶1的细土和沙子组成。

进一步地，细土的粒径为-80目，沙子的粒径为-60目。

根据本发明的另一方面还提供了一种细黄链霉菌固体培养基的制备方法，包括以下步骤：1)按权利要求1～5中任一项的比例称量各原料；2)将玉米粉、米糠和沙土混合，形成混合物；3)在混合物中加入营养液，并调节pH值至7.5～8.5，经灭菌处理，得到固体培养基。

进一步地，灭菌处理条件为：在128～135℃下施加1.5～3kg/cm²压力60～90分钟。

根据本发明的另一方面还提供了一种细黄链霉菌菌粉的发酵方法，包括以下步骤：1)液体发酵：将菌悬液接种到高氏一号培养液中进行液体发酵，至液体发酵中菌体生长进入细黄链霉菌的对数生长期，得到液体发酵液；2)固体发酵：将液体发酵液接种至如权利要求1～5中任一项的固体培养基中，进行固体发酵；固体发酵结束后干燥得到细黄链霉菌粉。

进一步地，液体发酵条件为：28～30℃，150～250r/分钟恒温振荡培养48～72小时；优选固体发酵条件为：在28～36℃下培养5～7天；优选固体发酵包括发酵初期和产孢期，发酵初期固体培养基的水分含量为40～50％，进入产孢期后固体培养基的水分含量小于35％。

进一步地，液体发酵步骤中，菌悬液的接种量为高氏一号培养液体积的8～12％；固体发酵步骤中，液体发酵液的接种量为固体培养基质量的8～12％；优选干燥条件为40-60℃下以空气作为干燥介质。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的培养基通过加入米糠，并协调玉米粉和沙土的混合量，使其既能保证足够的有机质的同时，通过增加沙土的相对加入量，使得菌种能在沙土之间进行增殖，增加固体培养基内的透气量，使得细黄链霉菌的增殖量和产孢子量得到提高。

除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。

本发明一方面提供了一种细黄链霉菌固体发酵培养基，包括30～60重量份的玉米粉、10～20重量份的米糠、30～50重量份的沙土和营养液；沙土由重量比为3～5∶1的细土和沙子组成。

现有技术中常用的麸皮和黄豆粉存在以下问题：麸皮基质中杂菌含量较高，生产、发酵过程中易感染杂菌，而提高所得菌粉的杂菌含量。以黄豆粉为菌体氮源时，菌体生长速度缓慢，不利于孢子的萌发和生长，产孢子数量较少。其中本文细土是指细粒土，颗粒最大粒径≤4.75mm，公称最大粒径大于2.36mm的土。包括各种黏质土、粉质土、砂和石屑。