[发明专利]马铃薯金线虫SCAR标记和LAMP快速检测方法及应用

权利要求书

1.马铃薯金线虫特异SCAR标记的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。

2.一种马铃薯金线虫特异性SCAR-PCR快速检测方法，其特征在于：SCAR-PCR反应体系中含有特异性引物GrF1和GrR1，其序列为：

GrFI：5’-GGACCCTGACCGAATTCTGTTCCA-3’

GrRI：5’-GGACCCTGACAACGGATGGCACGA-3’。

3.根据权利要求2所述马铃薯金线虫SCAR-PCR快速检测方法，其特征在于：SCAR-PCR反应体系中含有:2.5μl的10×PCR含Mg²⁺的Buffer；2μl10mM dNTP；1μl特异性引物GrF1和GrR1；1U Taq DNA聚合酶；1μl模板DNA；灭菌ddH2O补足至25μl。

4.根据权利要求3所述马铃薯金线虫SCAR-PCR快速检测方法，所述的SCAR-PCR反应条件为：94℃预变性4min，然后94℃30S，65℃60S，72℃2min循环35次，72℃延伸10min后保存在4℃条件下。

5.一种马铃薯金线虫LAMP快速检测方法，所述LAMP反应体系所使用的引物是：

①GrF3:5’-CCCTGACCGAATTCTGTT-3’，

②GrB3:5’-AAATTGTCGGACGCGAAT-3’，

③GrFIP:5’-CCGACCGATGGTTCAGAGAGCCAATATAATGTACAACAACATCTC-3’，

④GrBIP:5’-GTACACACACCGGTAGGCAAGAGAGAAATATTCTCAAATCTTGGA-3’。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：其中的LAMP反应体系包括：

1)引物混合液：外引物GrF3和GrB3各0.2μmol/L，内引物GrFIP和GrBIP各1.6μmol/L；

2)反应混合液：4mmol/L dNTPs，20mmol/L Tris-HCl(pH8.8)，10mmol/L KCl，5.75mmol/L MgS0₄，10mmol/L(NH₄)₂S0₄，0.1％Triton x-100，8U Bst DNA聚合酶大片段；

3)1μL DNA模板；

加灭菌双蒸馏水补足到20μL。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其中LAMP反应条件如下：将引物混合液和反应混合液混合均匀后加入1μLDNA模板后，61～65℃温育60～90min，82℃保温10min。

8.权利要求2-7任一所述检测方法在马铃薯金线虫早期诊断或鉴别中的应用。