[发明专利]一种人肺腺癌细胞系及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物动物细胞系领域，特别涉及一种人肺腺癌细胞系及其应用。 

背景技术

原发性肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年新发肺癌大约130万人，占全部新发癌症病例总数的12.3﹪，居首位，而尤以我国是该疾病的高发国家。近年的流行病学调查数据显示，肺癌是我国人群中发病率和死亡率上升最快的癌症之一。卫生部公布的的全国第三次死因调查结果中，肺癌居我国癌症死因首位，占全部癌症死因的22.7﹪，与70年代相比，我国的肺癌死亡率上升4.65倍，特别值得关注。

目前手术、化疗、放疗这些传统方案仍然是治疗肺癌的有效途径，随着相关辅助学科的发展，靶向治疗、生物治疗为肺癌患者带来新的希望，但是多数肺癌患者确诊时已是晚期，无手术机会，能手术的患者术后转移率高，术后生存率不高，总体预后欠佳。因而，寻求更加有效的肺癌治疗手段显得尤为重要。

肺癌细胞株作为肺癌发生机理及抗肺癌药物开发的接近临床肿瘤生物学特性的实验材料已被广泛应用，但全世界目前报道的肺癌细胞株仍为数不多。同时，已有的肺癌细胞株在反复的传代过程中，细胞特性与原始肿瘤细胞相比发生了很大变化。因此，肺癌原代细胞培养并建立细胞系在现阶段具有很大的应用价值，而针对我国肺癌的高发现象，建立我国自己的肺腺癌细胞模型具有更显著的科学意义和社会意义。

运用临床肿瘤组织直接体外培养建立细胞系往往混杂其它非肿瘤细胞，成功率较低。本发明通过运用临床肿瘤标本先初步体外扩增到一定的细胞数，再经动物皮下接种富集纯化肿瘤细胞，进而通过原代培养建立人源性肿瘤细胞系。该方法成功率较高，且细胞系接近于肿瘤的临床生物学特性，对药物的耐药性及敏感性有很好的预测性，是研究肺癌发生分子机制和抗肿瘤药物筛选的理想实验材料。 

 

发明内容

本发明的目的是针对现有的人肺腺癌细胞系存在的生物多样性低，与临床上肺腺癌的生物学性状相差较大等不足，提供一种新的人肺腺癌细胞系。

本发明的人肺腺癌细胞，于2014年5月23日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(地址：中国.武汉.武汉大学即湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心，邮编：430072)，培养物名称为人肺腺癌细胞ZRLC-1，保藏编号为CCTCC NO：C2014103。

本发明采用取自一位55岁女性肺腺癌手术切除标本，经体外初步培养扩增成一定数量级的细胞悬液后，接种于裸鼠皮下，成瘤后取出肿瘤组织，经体外培养获得稳定传代的一种新的肺腺癌细胞，命名为：ZRLC-1。

本发明人肺腺癌细胞ZRLC-1具有以下生物学特性：

1.细胞系贴壁生长，无接触抑制；

2.细胞系生长快速和代谢旺盛，具有良好的体外培养扩增性； 

3.细胞系染色体核型分析提示该细胞为近二倍体细胞系，有较多的染色体缺失、异位及衍生现象； 

4.细胞系高表达EpCAM（上皮细胞粘附分子），E-cadherin（E-钙粘蛋白）等上皮表面标志，细胞流式显示EpCAM阳性细胞达99.7﹪；

5.细胞系在无血清培养基条件下，具有一定的克隆球形成能力；

6.细胞传至第五代按2*10^6、2*10^5、2*10^4、2*10^3数量级接种裸鼠，均可成瘤，致瘤性强，组织切片提示移植瘤组织学特性与原发瘤相似。

本发明的进一步目的是提供该人肺腺癌细胞ZRLC-1作为实验材料在肺腺癌基础和临床研究中的应用，可用于建立肺癌发生、发展或转移的动物模型，可用于制备人肺腺癌相关药物疗效的分子检测方法中的应用。

本发明的人肺腺癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，并且高表达EpCAM，E-cadherin等上皮标志，细胞流式显示EpCAM阳性细胞达99.70﹪，为肺癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。具有强致瘤性，可以成功制备肺癌发生、发展或转移的动物模型，所制得的动物模型可以用于研究肺癌发生发展分子机制、筛选抗肺癌小分子化合物、探究肺癌的耐药机理以及发现肺癌转移新标志等，是人肺癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。 

附图说明

图1.本发明人肺腺癌细胞ZRLC-1的光镜下(×100)形态学观察； 

图2.本发明人肺腺癌细胞ZRLC-1的生长时间曲线；

图3.本发明人肺腺癌细胞ZRLC-1的染色体分析结果；

图4.本发明人肺腺癌细胞ZRLC-1的表面标志蛋白质印迹检测结果；