[发明专利]采用LAMP技术检测牛无浆体方法

权利要求书

1.采用LAMP技术检测牛无浆体方法，该检测方法包括LAMP引物设计、LAMP 反应体系建立以及采用LAMP检测方法，所述的 LAMP 检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测，所述的LAMP引物设计利用Primer Explorer V4软件针对牛无浆体16S rRNA基因的6个位点设计4条LAMP引物，引物包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP，其中： 

F3：GGGCATGTAGGTGGTTTGG；

B3：GCGTGGACTACCAGGGTAT；

FIP：TCTCCCGGACTCCAGTCTGGTAAAGGTGAAATGCCAGGGC；

BIP：ATTAGGAGGAACACCAGTGGCGCACGCTTTCGCACCTCAG。

2.根据权利要求1所述的采用LAMP技术检测牛无浆体方法，其特征在于：所述的LAMP 反应体系包括：

1）引物混合液：外引物为F3和B3各0.2 μmol/L，内引物为FIP和BIP各1.6 μmol/L，外内引物比为1：8；

2）反应混合液：0.8 mol/L Betaine，8 mmol/L MgSO₄，1.4 mmol/L dNTP Mixture，8 U/25 μL Bst DNA 聚合酶；

3）2μl DNA模版；

加灭菌双蒸馏水至25 μL。

3.如权利要求2所述的采用LAMP技术检测牛无浆体方法，其特征在于：所述LAMP 反应体系的反应条件，将引物引物混合液和反应混合液混合均匀后加入2 μL DNA模版，在60-65℃保温30-90min。

4.如权利要求3所述的采用LAMP技术检测牛无浆体方法，其特征在于：所述LAMP 反应体系的反应条件，将引物引物混合液和反应混合液混合均匀后加入2 μL DNA模版，在62℃保温60min。

5.如权利要求1所述的采用LAMP技术检测牛无浆体方法，其特征在于：所述的荧光可视化检测采用SYBR Green I染料，在每个管盖内侧添加1μL稀释10倍的SYRB Green I原液，合上管盖，反应结束后，轻甩反应管，使染料与产物混合。