[发明专利]一种平原条件下兔耳冻伤模型的制作方法

说明书

技术领域

本发明属于冻伤模型制作技术领域，具体涉及一种平原条件下兔耳冻伤模型的制作方法。

背景技术

生物医学研究的进展常常依赖于使用动物模型作为实验假说和临床假说二者的试验基础。人类各种疾病的发生发展是十分复杂的，要深入探讨其疾病的发病机理及疗效机理不能也不应该在病人身上进行。可以通过对动物各种疾病和生命现象的研究，进而推用到人类，探索人类生命的奥秘，以控制人类的疾病和衰老，延长人类寿命。 

人类疾病的动物模型（Animal Model of Human Diseases）是生物医学科学研究中所建立的具有人类疾病模拟性表现的动物实验对象和材料。使用动物模型是现代生物医学研究中的一个极为重要的实验方法和手段，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发展规律和创新药物的研发与评价。

冻伤是由于寒冷潮湿作用引起的人体局部或全身损伤。轻时可造成皮肤一过性损伤，要及时救治；重时可致永久性功能障碍，严重的可危及生命，需紧急抢救。而冻伤的临床发病机制是当身体较长时间处于低温和潮湿刺激时，就会使体表的血管发生痉挛，血液流量因此减少，造成组织缺血缺氧，细胞受到损伤，尤其是肢体远端血液循环较差的部位。目前有关平原兔耳冻伤模型的制作，主要依据中国人民解放军总后勤部卫生部《军队特需药品研发勤务技术指导原则（内部资料）》第10章，10.1项“寒冷环境因素对人体损伤防治药物”的记载，但造模技术落后，造模条件可控性差，缺乏实用性和可行性。

发明内容

为克服现有技术不足，本发明目的在于提供一种平原条件下兔耳冻伤模型的制作方法，该方法造模可控性强，操作实用方便。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种平原条件下兔耳冻伤模型的制作方法，该方法为：冻伤前，先用剪毛法剪去兔双耳自耳尖向耳根方向70－80mm区域内的毛，并在该剪毛分界处用笔涂一直线作为浸冻边界线，然后将兔双耳的耳尖至浸冻边界线之间的区域同时浸入温度-24.5±2℃、浓度90－95%的乙醇中，待两耳冻结（即变白、变硬）开始计时，65±5s后取出，拭干后在空气中自然复温，造成兔耳冻伤模型。

较好的，冻伤前，先用剪毛法剪去兔双耳自耳尖向耳根方向70－80mm区域内的毛，其中于50±5mm处留1～2mm宽的毛不剪。在50±5mm处预留1～2mm宽的毛不剪，这样当兔耳浸入乙醇中冷冻时，便于观察浸冻边界。用笔涂的直线，浸冻时间长了，有时容易被乙醇溶解掉。

剪毛法采用本领域常规技术即可，如：固定动物，先用蘸有水的纱布把被毛浸湿，再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤，剪下的毛应集中放在一容器内，防止飞扬。

本发明针对平原条件下冻伤疾病的相应临床指标，建立了一种新型平原兔耳冻伤模型的制作方法以及相应指标的标准化检测及病理评价技术，为开展平原冻伤的发病机理研究和创新药物的研发与评价提供了有力的技术支撑。

附图说明：

图1为冻伤模型对照组兔耳冻后第3d的图片；图中，A为给基质耳背侧面，B为给基质耳腹侧面，C为模型对照耳背侧面，D为模型对照耳腹侧面；

图2为冻伤模型对照组兔耳冻后第5d的图片；图中，E为给基质耳背侧面，F为模型对照耳背侧面，G中为模型对照耳（左）、基质耳（右）的腹侧面；

图3为冻伤模型对照组兔耳冻后第12d的图片；图中，H为给基质耳背侧面，I为给基质耳腹侧面，J为模型对照耳背侧面，K为模型对照耳腹侧面；

图4为阳性对照药治疗组兔耳冻后第3d的图片；图中，L为给药耳背侧面，M为模型对照耳背侧面，N中为模型对照耳（左）、给药耳（右）的腹侧面；

图5为阳性对照药治疗组兔耳冻后第5d的图片；图中，O为给药耳背侧面，P为模型对照耳背侧面，Q中为模型对照耳（左）、给药耳（右）的腹侧面；

图6为阳性对照药治疗组兔耳冻后第12d的图片；图中，R为给药耳背侧面，S为给药耳腹侧面，T为模型对照耳背侧面，U为模型对照耳腹侧面；

图7为不同组兔耳冻伤病理组织学的变化（×100，HE染色），图中，U为阴性对照组，V为冻伤模型对照组，W为阳性对照药治疗组。

具体实施方式：

以下通过具体实施例来说明本发明技术方案，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1