[发明专利]一种多重实时荧光定量PCR技术快速检测人21号染色体数目的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种多重实时荧光定量PCR技术快速检测人21号染色体数目的试剂盒，属于分子生物学领域。

背景技术

唐氏综合征(Down’s syndrome)也称为21-三体综合征,是人类最常见的染色体数目异常引起的非整倍体疾病,新生儿发生率为1/600～1/800。患儿主要表现为严重的先天性智力障碍和各种器官先天性畸形,多数患者生活无法自理。目前,该病尚无有效的治疗方法,因此,进行产前诊断防止患儿的出生是预防该类疾病发生的主要方法。长期以来,羊水细胞培养、染色体核型分析成为产前诊断的经典方法(Caspersson T,Zech L,Johansson C,et al.Identification of human chromosomes by DNA-binding fluorescent agents[J].Chromosoma,1970,30(2):215-227.),但是，该方法存在费时(一般要两周以上)、容易培养失败以及不能检测较小的染色体结构畸变等缺点。荧光原位杂交(FISH)技术应用于产前快速诊断，无需进行细胞培养，24小时内就可得出检验结果成为可能(Ho SSY,Chua C,Gole L,et al.Same-day prenatal diagnosis of common chromosomal aneuploidies using microfluidics-fluorescence in situ hybridization[J].Prenatal Diagnosis,2012,32(4):321-328.等)；但是由于该技术操作繁琐并且要求具有良好的技术专业性，使得该技术不能大量的进行临床标本的应用。因此，应该需要建立更加快速而有效的产前诊断方法来弥补以上方法的一些缺陷和不足。

随着分子生物学的发展,目前已出现了几种快速分子诊断非整倍体的方法。QF-PCR方法是目前应用最广的一种方法，该方法能实现非整倍体的准确检测(Atef SH,Hafez S,Helmy S,et al.QF-PCR as a Rapid Technique for Routine Prenatal Diagnosis of Fetal Aneuploidies[J].Pediatric Research,2011,70:412-412.)，该技术的主要缺点是诊断需要依靠多态性位点，而多态性位点可能在某一人群能较好的进行诊断，而因为种族的差异可能会出现在其它人群中出现无法进行诊断的情况(Mann K,Donaghue C,Fox SP,et al.Strategies for the rapid prenatal diagnosis of chromosome aneuploidy[J].Eur J Hum Genet,2004,12:907-915.)；并且，其在PCR扩增后还需要毛细管电泳分析其片段片度，因此，仪器及试剂的费用也限制了该方法的广泛应用。多重连接探针扩增(MLPA)技术最开始应用于基因拷贝数的变化，后来应用于非整倍体疾病的诊断(Slater HR,Bruno DL,Ren H,et al.Rapid,high throughput prenatal detection of aneuploidy using a novel quantitative method(MLPA)[J].Journal of medical genetics,2003,40(12):907-912.)，由于该技术需要杂交过夜、连接以及产物的后续毛细管电泳分析等步骤，实验相对繁琐且后续分析昂贵费用影响了该技术的广泛应用(Willis AS,Veyver I,Eng CM.Multiplex ligation‐dependent probe amplification(MLPA)and prenatal diagnosis[J].Prenat Diagn,2012；32:315-320.)。