[发明专利]一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于园艺作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法。

背景技术

茄子(Solanum melongena L.)别名落苏，原产于东南亚、印度，早在公元4-5世纪就传入中国，至今已有1500年左右的历史，是我国春夏季节的主要果菜之一。茄子栽培种分为圆茄、长茄和矮茄三个变种；按果皮颜色划分，包括紫色、白色及绿色三种类型；按熟性划分，包括早熟、中熟和晚熟三种类型。目前全国茄子栽培面积80万hm²，约占世界总栽培面积的50％(吴仁锋，2011)。

褐纹病(吕佩珂等，2008)是茄子上的一种主要病害，也是一种世界性病害，又称干腐病、褐腐病，在我国南北方均普遍发生，从幼苗期到果实采收期均可发病，引起缺苗、枯枝或果实腐烂(吴仁锋，2011)。最为严重的是褐纹病对茄子采种危害甚大，许多田块常因此病的大发生而导致种子严重减产甚至绝收(中国农作物病虫害编辑委员会，1979)。

目前茄子褐纹病的防治手段主要通过栽培和化学防治的方法，但是综合状况并不是十分理想，同时，采用药剂防治褐纹病涉及到成本增加和残留等问题，因此，解决褐纹病危害最经济的措施就是培育高抗褐纹病的品种，筛选抗病品种是有效而又迫切的防控茄子褐纹病的主要方法之一，可极大提高茄子生产的经济效益。抗性资源的获得对于抗病育种意义重大，客观、快速地评价茄子材料抗性的强弱是茄子抗褐纹病育种过程中最基础、最重要的环节。在抗病育种过程中，在室内进行抗病性鉴定环境条件容易控制，发病迅速，操作简便，建立茄子抗褐纹病的室内鉴定方法有利于抗病育种工作的开展，填补国内茄子褐纹病抗病育种研究空白。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法，与大田接种相比，本发明避免了气候条件的不适宜、环境中其它病虫害影响等因素，在室内进行抗病性筛选条件容易控制、标准一致、发病迅速、操作简便、结果可靠，节省大量人力物力，适合大批量育种材料的鉴定。该方法包括茄子育苗与定植、褐纹病菌孢子悬浮液制备、病原菌侵染处理、发病调查等步骤。

本发明通过以下技术方案实现：

一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法，该方法包括以下步骤：

1)茄子育苗与定植

将供试的茄子种子播种在装有灭菌基质的穴盘中，种子萌发出苗后分穴到一穴一株，当茄苗长至3-4片真叶时，移植田间定植，每个品种栽种40株，定植后按常规施肥和灌水，期间不使用任何药剂，待茄子结果后田间采收商品茄果到室内进行离体人工接种；

2)茄褐纹病菌孢子悬浮液制备

茄褐纹病菌病样采自武汉市蔬菜科学研究所茄子试验基地，发明人自行分离获得茄褐纹病菌HZ-4，Phomopsis vexans HZ-4，该菌株已于2014年7月3日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2014313。

将茄褐纹病菌HZ-4菌株接种至PDA平板上，将该PDA平板置于25℃黑暗培养9-11d至产生黑色分生孢子器，用消过毒的镊子取分生孢子器并用消过毒的玻片碾压使之散出分生孢子，用无菌水冲洗，经充分震荡使孢子释放出来，静置片刻，取上清，用显微镜观察分生孢子量，显微观察方法为(目镜10×，物镜10×)每个视野观察18-22个孢子，将剪好的5mm×5mm的滤纸片放入茄褐纹病菌孢子悬浮液中，充分浸湿备用，得到含茄褐纹病菌孢子悬浮液的滤纸片；

3)病原菌侵染处理

取大小一致的成熟茄果，用消过毒的自制的十字形刀具(见图2)在健康无病的茄果上划5mm长2mm深的“十”字伤口，然后取步骤2)的含茄褐纹病菌孢子悬浮液的滤纸片贴在茄果“十”字伤口处作病原菌侵染处理，将侵染后的茄果统一平放在塑料盒内，用喷壶喷水至未见明显水滴下流，用保鲜膜覆盖，在25-28℃条件下保湿培养，5d后开始调查；同时将对照的茄果划“十”字伤口后只接种无菌水；

各品种接种7-8个茄果，在每个果实的果肩至果脐部随机划“十”字伤口10个以上，相邻两个伤口之间留足足够的发病空间；

4)发病调查

接种后第5d开始调查，记录各处理的发病情况；待各处理的病情基本稳定、无新病斑出现时，停止调查，统计其病果率及发病点数，评价各品种对褐纹病的抗性水平；