[发明专利]重组人骨形态发生蛋白异源二聚体蛋白及高效表达和复性方法

权利要求书

1.一种重组人骨形态发生蛋白异源二聚体蛋白，其特征在于：所述蛋白从N端到C端的顺序是BMP7-连接肽-BMP2，所述连接肽是由3个GlyGlyGlyGlySer重复氨基酸序列组成。

2.表达权利要求1所述蛋白的基因工程菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌感受态BL21(DE3)，所述表达载体为pHis-NusA，所述载体的目的序列为BMP7和BMP2成熟肽基因通过编码连接肽的DNA片段连接，获得编码BMP异源二聚体的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于：所述表达载体为pHis-NusA的克隆位点为Nde Ⅰ和EcoR Ⅰ。

4.高效表达生产如权利1所述的异源二聚体蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：

⑴将BMP7和BMP2成熟肽基因通过编码连接肽的DNA片段连接，获得编码BMP异源二聚体的核苷酸序列；

⑵将步骤⑴所获得的DNA序列克隆到表达载体上；

⑶将重组质粒转化至宿主菌，诱导蛋白表达；

⑷离心收集菌体，用裂解液重悬菌体，超声破碎，离心收集沉淀；

⑸进行表达蛋白包涵体的洗涤纯化，并进行复性。

5.根据权利要求4所述的表达生产如权利1所述的异源二聚体蛋白的方法，其特征在于：所述步骤⑵中克隆位点为Nde Ⅰ和EcoR Ⅰ，表达载体为pHis-NusA。

6.根据权利要求4所述的表达生产如权利1所述的异源二聚体蛋白的方法，其特征在于：所述步骤⑶中宿主为大肠杆菌。

7.根据权利要求4所述的表达生产如权利1所述的异源二聚体蛋白的方法，其特征在于：所述步骤⑸中包涵体洗涤剂为：0.1M磷酸钠，250mM NaCl，4M urea，1％Triton X-100，1mM EDTA，PH＝7.4。

8.根据权利要求4所述的表达生产如权利1所述的异源二聚体蛋白的方法，其特征在于：所述步骤⑸中复性方法采用透析复性，复性过程尿素浓度梯度为8M-2M-1M-0M。

9.权利要求1所述的重组人骨形态发生蛋白异源二聚体蛋白的复性方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

以编码BMP7和BMP2成熟肽的DNA为模版，通过融合PCR技术，将BMP7和BMP2基因以编码连接肽DNA的片段连接；将所获序列克隆到表达载体pHis-NusA上，构建重组质粒，将重组质粒转化至大肠杆菌中，以0.5mM的IPTG为诱导剂，诱导表达蛋白；收集菌体，用裂解液重悬菌体，超声破碎，收集沉淀；用权利要求5中的包涵体洗涤液进行洗涤后，8M尿素变性，将上清转至透析袋，进行尿素浓度梯度复性，尿素浓度梯度为8M-2M-1M-0M,磁力搅拌器搅拌，每个浓度梯度复性3小时；收集上清，得到复性好的BMP异源二聚体蛋白。