[发明专利]一种病毒中和抗体定量检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种病毒中和抗体的定量检测试剂盒，其特征是由96孔细胞板、Vero细胞、100TCID50病毒液、NP蛋白单抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠Ig，底物四甲基联苯胺TMB显色剂组成。

2.根据权利要求1所述一种病毒中和抗体的定量检测试剂盒的使用方法，其特征是由以下步骤构成:

(1)抗体-病毒混合物和Vero细胞共培养：将系列倍比稀释的待检抗体和100TCID50/50μL的稀释病毒液混合，放入37℃培养箱作用1h，每孔加100μl1.5x104细胞/孔的细胞，细胞培养板在37℃，5％CO2孵箱中培养20～24h；

(2)固定：用PBS液洗细胞2次，每孔加入80％的冰丙酮100μl，室温固定细胞10min；

(3)酶标仪检测：每孔加入稀释后的NP蛋白的单抗1000μl，室温作用1h，用250μl/次PBS+0.05％TWEEN-20洗涤液洗洗板4次，每孔加入100μl稀释后的HRP标记的羊抗鼠IgG，室温作用1h，用250μl PBS+0.05％TWEEN-20洗涤液洗涤板6次，每孔加入TMB底物100μl，室温放10min显色，CC对照孔尚未变色时，每孔加入1M硫酸100μl终止反应，用450纳米酶标仪读出每孔OD值；

(4)结果判读：结果判定采用公式：X＝(VC平均OD值—CC平均OD值)/2，X表示50％的Vero细胞感染时的OD值，每孔OD值低于X值时，判定为中和抗体检测阳性，中和抗体阳性的血清最高稀释度即为血清的中和抗体效价。

3.权利要求1所述一种病毒中和抗体的定量检测试剂盒在发热伴血小板减少综合征病毒早期感染检测中的应用。

4.权利要求1所述一种病毒中和抗体的定量检测试剂盒在发热伴血小板减少综合征疫苗的临床免疫效果评价或人群或动物群发热伴血小板减少综合征血清流行病学研究中的应用。