[发明专利]HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠模型的构建方法。

背景技术

慢性肝炎(chronic hepatitis)是威胁人类健康的最常见疾病之一，多种因素如慢性病毒感染，过量酒精摄入，代谢性疾病及机体免疫紊乱，均可导致长期慢性肝组织损伤，造成肝脏组织病变，甚至发生慢加急性肝炎及原发性肝癌。在欧美等国，慢性肝炎主要由过量酒精摄入引起，如60％以上的肝硬化及肝癌患者就有酒精性肝病病史。而在中国，慢性病毒感染是慢性肝炎及肝硬化、肝癌的最主要病因，其中主要包括乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染。病毒性肝炎是造成慢性肝组织损伤、慢性及慢加急性肝衰竭最终导致患者死亡的重要原因。截至目前，针对病毒感染的治疗取得了很大进步，但由于存在病毒基因突变，服药周期长，患者不能耐受药物副作用等诸多问题，慢性肝炎的治疗依然任重而道远。

肝炎病毒感染机体后，一方面引发机体产生针对病毒的免疫应答，主要是细胞毒性T细胞(CTLs)、辅助性CD4+T细胞及天然免疫系统的参与，消灭病毒感染的细胞，同时也造成肝组织损伤。因此，免疫介导的肝损伤是病毒性肝炎造成肝损伤的主要发病机制；同时由于肝炎病毒的种属限制，模拟生理状态下病毒感染造成的免疫介导的肝损伤动物模型亦很有限。前期研究报道，将HBV病毒DNA导入CD8+T细胞中，得到CTLs，并将携带HBV的CTLs注射小鼠，得到了肝炎小鼠动物模型，其突破了HBV病毒的种属限制，但也存在局限性，如需要反复多次CTLs注射，且肝组织损伤有一定的自限性。目前最常用的肝炎动物模型之一，即注射刀豆蛋白(ConA)诱导的肝损伤小鼠模型。刀豆蛋白可诱导T细胞异常活化，造成肝组织损伤，但刀豆蛋白诱导的肝损伤属于抗原非特异性，且具有剂量依赖性，主要是活化的CD4+T细胞的参与，并可造成多脏器损伤。另外一些研究尝试给动物动态注射携带有病毒基因的腺病毒、逆转录病毒重组载体，以建立病毒感染的肝炎模型，缺点是病毒易发生突变，并受病毒和宿主等各方面的影响。

慢性病毒感染导致肝组织受损，长期的慢性肝炎是肝功能逐渐减退、肝硬化，并最终部分发展为原发性肝癌(HCC)的重要原因。因此如何最大限度地保护肝功能是目前亟待解决另一难题。肝脏除了是重要的代谢器官，也是最重要的免疫器官之一。肝脏是天然的免疫耐受器官，有大量的免疫细胞分布，如淋巴细胞、单核巨噬细胞(库弗细胞)、自然杀伤细胞(NK细胞)和具有免疫抑制功能的调节性T细胞(Treg)及髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)，这些免疫细胞在维持肝脏局部免疫耐受中发挥重要作用。随着免疫学认识的深入，MDSCs在感染性疾病及自身免疫病中的作用受到极大重视。