[发明专利]一种基于血清miRNA的试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种基于血清miRNA的试剂盒，其特征是试剂盒的组成部分为AMV反转录体系、PCR反应体系、miR-16内参、阴性质控品和4种miRNA特异性引物探针；4种miRNA名称和序列分别是：hsa-miR-188-3p CUCCCACAUGCAGGGUUUGCA、hsa-miR-517a-3p AUCGUGCAUCCCUUUAGAGUGU、hsa-miR-518f-5p CUCUAGAGGGAAGCACUUUCUC和hsa-miR-511-3p AAUGUGUAGCAAAAGACAGA。

2.根据权利要求1所述一种基于血清miRNA的试剂盒的使用方法，其特征是由以下步骤构成:

(1)反转录：按照AMV逆转录体系配置除RNA、RT-Primer之外的母液，将7μl母液、2μlRNA与1μl引物混合均匀,反应程序为：第一步：16℃，15min；第二步：42℃，60min；第三步：85℃，5min；第四步：降温至4℃,阴性对照cDNA制备与样本cDNA制备同时进行，用DEPC水代替RNA；

(2)qRT-PCR检测：配置qRT-PCR体系中除cDNA和probe以外的母液,将1μl cDNA、0.33μl Probe与14.77μl母液均匀混合，并且每个样本每种miRNA检测三复孔，加入96孔PCR板中，每板中分别加入10-3、10-4、10-5、10-6的miR-16样本体系混合物各三复孔，混合均匀,在ABI7900荧光定量PCR仪上进行qRT-PCR反应，反应条件为95℃5min；95℃15s，60℃1min，40个循环；

(3)结果判定：检测标本和阴性对照间比较采用t检验，P<0.05为差异显著，判为标本检测阳性。

3.权利要求1所述一种基于血清miRNA的试剂盒在发热伴血小板减少综合征病毒早期感染检测中的应用。