[发明专利]一种缓解畜禽应激的复合微生态制剂及应用

说明书

技术领域

本发明属于兽用微生物添加剂制备技术应用领域，具体涉及一种缓解畜禽应激的复合微生态制剂及应用。复合微生态制剂复合菌剂涉及屎肠球菌(Enterococcus faecium)菌株和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株两者的混合及其作为饲料添加剂的制备。

背景技术

目前，在畜牧业生产中抗生素作为饲料添加剂被长时间超剂量使用，导致了大量耐药菌株的产生、畜禽产品中药物残留、动物肠道菌群失调等问题，已引起人们的广泛关注，因此研制绿色、无污染、无残留的抗生素替代品已成为热点。益生菌具有天然、安全、无残留、无污染等优点，能够防止动物疾病、促进肠道健康、提高饲料利用率等，已成为抗生素最佳替代品之一(Shanahan F et al2000)。

由于在现代集约化养殖过程中，被饲养的畜禽经常会受到各种各样的应激，包括：生产环境、高温、运输、饲养管理及病原菌感染等，这些因素中高温所导致的应激是非常普遍的现象。对于益生菌缓解畜禽应激的效果研究目前还比较少，并且饲料行业中使用率较高的益生菌产品主要是乳酸菌类和枯草芽孢杆菌类，对于以上两种单菌在动物生产中的应用效果均有报道。辛娜等(2011)研究结果表明，饲喂芽胞杆菌能显著提高蛋鸡产蛋率和蛋重。陈旭东等(2003)研究表明，芽胞杆菌可使仔猪平均日采食量提高15％以上，腹泻率降低75％左右。但由于芽胞杆菌在动物肠道中的定植时间较短，因此许多学者力求寻找一种定植能力强、益生效果明显的肠道益生菌来弥补芽胞杆菌的不足。目前主要研究较多的乳酸菌包括乳酸杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌。研究表明乳酸菌是肠道内定植能力很强的一类益生菌，通过“占位”来抑制病原菌的粘附(Ling W et al1994)，从而显著减少肠道疾病的发生(Bhardwaj et al2008)。通过分析芽胞杆菌与乳酸菌间作用的异同，为创制芽胞杆菌-乳酸菌复合微生态制剂提供新的思路，并且依据动物肠道多菌共生的特点和不同菌株之间的相互关系，为使菌种之间的优势互补，充分发挥菌株间的协同增效作用，进而开发出更有利于提高动物性能的复合制剂将是今后益生菌的发展趋势(Wang H et al2014)。但两者配合使用效果到底如何，却鲜有报道。

因此，本发明对从临床分离的屎肠球菌HDRsEf1和枯草芽孢杆菌HDRaBS1进行复配，形成复合微生态制剂，以蛋鸡热应激为出发点，研制缓解畜禽应激的复合微生态制剂，并与单一添加屎肠球菌的应用效果相比较。

发明内容

本发明的目的在于从临床分离筛选两株即安全又有明显益生特性的菌株：枯草芽孢杆菌HDRaBS1与屎肠球菌HDRsEf1，体外抑菌试验证明两者菌株不存在相互抑制作用，并依据菌株不同的生物学特性进行复配，形成复合微生态制剂，通过动物试验验证其抗应激效果，研制缓解畜禽应激的复合微生态制剂。

本发明的技术方案如下：

申请人复配了一种缓解畜禽应激的复合微生态制剂，其包含有屎肠球菌HDRsEf1菌剂和枯草芽孢杆菌HDRaBS1菌剂，所述的枯草芽孢杆菌HDRaBS1，Bacillus subtilis HDRaBS1于2011年1月24日送交中国·武汉·武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC NO.M2011034；所述的屎肠球菌HDRsEf1，Enterococcus faeciumHDRsEf1于2011年1月24日送交中国·武汉·武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO.M2011031(参见中国发明专利授权说明书，专利号ZL2011104520872，发明名称：一株益生屎肠球菌的筛选及应用；发明专利申请公开号CN102747003A)。

枯草芽孢杆菌HDRaBS1的菌学特征：

该菌株为革兰氏阳性菌，在LB培养基上菌落呈现典型芽胞的菌落特性：白色，边缘不整齐，菌落中间形成明显皱褶。经革兰氏染色镜检观察，细菌在12h时呈长杆状，单个、成对或链状排列，24h时已明显形成芽胞。菌株能耐受2-8％NaCl、pH2.0的生长环境；可在37℃生长、90℃耐受15min、厌氧环境下不生长、硝酸盐试验为阳性，能水解葡萄糖、阿拉伯糖等，说明该菌株在表型上初步鉴定为枯草芽孢杆菌；并进一步对其16SrRNA基因进行克隆测序，结果在NCBI进行BLAST比较，发现其16SrRNA与枯草芽孢杆菌(GU258545.1)的序列同源性最高，相似性为99％(见序列表SEQ ID NO：1)。另外，从该菌基因组中扩增出枯草芽孢杆菌特异性片段rpoA(256bp)。