[发明专利]从提取玫瑰精油后的废液中提取黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对天然产物处理后的废液进行再处理的方法，确切讲本发明是一种利用水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油后的废液提取黄酮的方法。 

背景技术

水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油是在玫瑰花中加入4-5倍的水，然后在100℃加热并煮沸2-3小时进行精油提取。现有技术中水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油后的液与废渣只是被简单的用作饲料添加剂或是当做肥料处理，或者直接排出丢弃，后一种情况下废液还可能成为一种污染物。 

有关的研究表明玫瑰花中存在着黄酮类化合物。中国发明专利申请201210317876.X公开了一种以玫瑰花为原料，通过浸膏提取、硅胶柱层析氯仿-甲醇梯度洗脱、硅胶柱层析石油醚-乙酸乙脂梯度洗脱，最后经过高效液相色谱纯化，得到一种黄酮。显然，现有技术不适用于从提取玫瑰精油后的废液中提取黄酮。 

发明内容

本发明提供一种利用水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油后的废液提取总黄酮的方法。 

从提取玫瑰精油后的废液中提取黄酮的方法，将提取玫瑰精油后的废液除去固体残渣后上大孔树脂柱，用乙醇/水0%-100%溶液梯度洗脱后，减压浓缩后上聚酰胺柱，用乙醇/水0%-100%溶液梯度洗脱后，再经浓缩后上MCI柱，用乙醇/水0%-100%溶液梯度洗脱后，得提取精油后玫瑰废液总黄酮提取物。 

 本发明的从提取玫瑰精油后的废液中提取黄酮的优选方法是：将提取玫瑰精油后的废液100mL，过D-101型大孔树脂，先用4-6倍柱体积的蒸馏水，再用4-6倍柱体积的15%乙醇溶液洗脱，接着用4-6倍柱体积的30%乙醇洗脱，回收洗脱液蒸去溶剂。所得样品上聚酰胺柱，先用4-6倍柱体积蒸馏水洗脱，再用4-6倍柱体积的15%乙醇溶液洗脱，再接着用4-6倍柱体积的30%乙醇溶液洗脱，回收洗脱液蒸去溶剂，可得总黄酮含量为50%以上的粗产品。将所得粗产物过100gMCI色谱柱, 先用4倍柱体积蒸馏水洗脱，再用4倍柱体积15%乙醇溶液洗脱，接着用4倍柱体积30%乙醇溶液洗脱，回收洗脱液。可得产品约15mg，总黄酮含量约80%。 

本发明可对天然产物—玫瑰花进行深度的开发，充分提取其中的有用成分，避免了现有技术造成的玫瑰花中有效成份的浪费和环境污染。本发明的方法还具有方法相对更为简单，所使用的溶剂无毒无害，可得到高含量黄酮产品的优点。 

具体实施方式

本发明的一个具体提取方法如下： 

将用水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油后的废液用离心法除去固体残渣。取废液100mL，过D-101型大孔树脂，先用4-6倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用4-6倍柱体积的15%乙醇溶液洗脱，接着用4-6倍柱体积的30%乙醇洗脱，回收洗脱液蒸去溶剂。所得样品上聚酰胺柱，先用4-6倍柱体积蒸馏水洗脱，再用4-6倍柱体积的15%乙醇溶液洗脱，再接着用4-6倍柱体积的30%乙醇溶液洗脱，回收洗脱液蒸去溶剂，可得总黄酮含量为50%以上的粗产品。将所得粗产物过100g MCI色谱柱, 先用4倍柱体积蒸馏水洗脱，再用4倍柱体积15%乙醇溶液洗脱，接着用4倍柱体积30%乙醇溶液洗脱，回收洗脱液。可得产品约15mg，总黄酮含量约80%。

本发明所得产品总黄酮含量的测定方法如下： 

标准溶液的配制

准确称取120℃干燥至恒重的芦丁标品6.6mg，用60%的乙醇溶解, 转移到10mL的容量瓶中，用60%乙醇定容，摇匀，母液浓度为0. 66mg/ mL。准确吸取上述溶液0. 2、0. 4、0. 6、0. 8和1. 0分别置于10mL 的容量瓶中，分别加入0. 3mL 5% NaNO₂ 溶液, 摇匀, 在室温的条件下放置6min后，分别加入0. 3mL 10% Al ( NO₂ ) ₃溶液，摇匀, 在室温的条件放置6min，再分别加入4% NaOH 溶液4mL, 最后用60%乙醇溶液补足至 10mL, 摇匀，放置15min, 以空白试剂为对照, 在510nm处测吸光度y。以样品量为横坐标，吸光度值为纵坐标进行线性回归，得对照品的标准曲线，回归方程为y = 13.75x - 0.0015，R²=0.9987。表明对照品的量与吸光度值的线性关系良好。

样品的测定 

准确称取样品6.0mg，用60%乙醇溶解，转移至10mL容量瓶中，并用60%乙醇定容，作为试样液。按照标准溶液的铝盐显色法在510nm处测吸光度y，通过曲线回归方程计算出黄酮的含量。