[发明专利]蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法

权利要求书

1.一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将带有侧芽的无病虫害的蝴蝶兰花梗剪成2～3cm的节段，将芽点外层的苞叶用镊子等工具剔除，加入4～6ml吐温20充分搅拌后在自来水下冲洗30min以上，转移至超净工作台内用70%～75%的酒精消毒30s左右，再用无菌水处理2～3次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5次，用消毒滤纸吸干表面水分，切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸或/和维生素C或/和pvp或/和活性炭+30～40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁，pH值为5.4～5.9，培养条件为：温度25±2℃，培养初期的7～10d进行暗培养，以后光照时间为11～13h/d,光照强度2000～3000lux；

  （2）将被切腋芽花梗以初代培养基作为继代培养基继代培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸+30～40g/L香蕉泥，pH值为5.4～5.9；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d,光照强度2000～3000lux；

  （3）当丛生芽被诱导长至2cm左右高时，将芽切割分开成单枝，转移到生根培养基中培养，生根培养基为：1/2MS或/和MS+0.5～1.5mg/L NAA +25～30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +1～3g/L 活性炭或/和柠檬酸或/和维生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d，光照强度2000～3000lux；

 （4）试管苗炼苗及移栽：当诱导出根系的培养苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，叶长度2～3cm时，就可进行炼苗，将培育苗取出培养箱，带瓶培养苗在苗木培养室自然光下初炼苗放置4～6d，后在培养室自然光下打开培养瓶盖炼苗2～4d，期间用喷壶喷洒蒸馏水至叶片，保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾浸泡3～5min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上。

2.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（1）中的初代培养基为：1/2MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6 /L琼脂+400mg/L柠檬酸+40g/L香蕉泥，pH值为5.8。

3.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中的生根培养基进一步优化为：1/2MS+1.0mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +2g/L 活性炭+40g/L香蕉泥，pH值为5.8。

4.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（1）的培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux。

5.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中的生根培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000～3000lux。

6.根据权利要求2、3、4所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的香蕉泥是把新鲜香蕉用榨汁机打碎。