[发明专利]蝇蛆活性蛋白肽的制备方法与所制备的蝇蛆活性蛋白肽及其用途

说明书

本发明提供了一种蝇蛆活性蛋白肽的制备方法，所述方法包括新鲜蝇蛆冷冻、解冻、磨浆、调节pH、抽提、离心分离、超滤、纳滤脱盐、浓缩、过滤除菌、冷冻干燥、分装制品获得蝇蛆活性蛋白肽等步骤。本发明方法操作简单，生产成本低廉，适用于大规模工业化生产，实现了从蝇蛆中高效制备蛋白肽的目的。本发明还涉及到通过本发明方法制备获得的蝇蛆活性蛋白肽，其具备对烧伤后的患者具有显著的皮肤再生修复功能的活性。本发明还涉及通过本发明方法制备的蝇蛆活性蛋白肽的用途，所述用途包括将所述蝇蛆活性蛋白肽在制备预防和/或治疗人类创伤性皮肤疾病的药物、食品、保健品或化妆品中的应用。

技术领域

本发明涉及从蝇蛆中制备高活性蛋白肽的方法与所制备的产品及其用途，属于蛋白质生物化学、医学和制药领域。

背景技术

家蝇(Musca demestica)是家蝇属(Musca)动物，是完全变态昆虫，其生活史包括卵、幼虫(蝇蛆)、蛹、成虫(苍蝇，Fly maggot)四个阶。蝇蛆在自然界中无所不在，具备完备的抗菌、生殖和损伤修复机制，有极强的环境适应能力。这种环境适应机制是家蝇在长期的进化过程中获得的。研究表明，蝇蛆体内含有强大的防卫机制，如抗菌肽、抗氧化能力的过氧化物酶和金属硫蛋白等、自我修复能力的表皮生长因子等。蝇蛆的这些功能性成分为疾病医疗应用提供了贵重的药物资源。蝇蛆疗法在清理伤口的医疗功效，主要起源于1860年初人类对蝇蛆活动在伤口产生正面效应的了解，其中的美国内战和1910年代的第一次世界大战期间，对受伤士兵的治疗。近年来医学界对蛆疗法的重新重视，主要是对于部分慢性伤口感染及一些对抗生素产生抗性的超级病菌的处理。虽然并不是所有的伤口感染都适合使用蝇蛆疗法，但国外已有许多医院开始使用这类方法，治疗一些如糖尿病患者的慢性溃疡伤口、褥疮、烧烫伤，或是如福耳尼坏疽等难缠的发炎，有的治疗也已获得了很好的效果。蝇蛆在伤口上的医疗机制，一般认为至少具有清除坏死组织、抗菌和加速愈合等功效。在使用蝇蛆疗法时，最大的挑战除了病患的心理障碍外，应该就是如何取得安全卫生的医用无菌蛆。到目前为止，虽然还无法了解蝇蛆在治疗伤口时的完整机制，但最近的研究显示蛆虫的分泌物质有高度抗菌效果，且有极佳的稳定性，可能有开发成为新一代抗超级病菌药剂的希望。

在制备方法方面，CN103555798公开了一种制备蝇姐蛋白肽的方法，该方法采用了，新鲜蝇蛆活性蛋白肽肽经过清洗、破碎、热处理、酶解、灭酶等步骤后，用陶瓷膜分离技术对酶解液进行分离和纯化，然后经浓缩以及喷雾干燥等步骤。但方法的缺点是所制备的高温干燥粉碎法和灭酶来纯化蝇蛆活性蛋白肽肽，所制备的蛋白在制备过程中彻底变性。相类似的方法的还有很多。利用变性的蝇蛆活性蛋白肽肽所制备药物必然治疗的效果差，治疗周期差，给患者带来更多的痛苦和药费的损失。在生产上带来更多的成本消耗。因此现有技术中，急需提供一种能够保持蛋白活性的新型制备方法。以满足国际对蝇姐蛋白的食用、医用和美容化妆品的需求。基于现有技术存在的实质性缺欠，本发明在生产过程中，淘汰了使用高温干燥粉碎法，在低温(0-18℃)条件下，经去除杂蛋白以及多糖、胆固醇、脂类物质等，制备蝇蛆活性蛋白肽肽。利用所制备的的蝇蛆活性蛋白肽，对皮肤损伤具有明显的修复功能的活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种高品质(活性高见效快)的蝇蛆活性蛋白肽的制备方法所述方法所述方法包括新鲜蝇蛆冷冻、解冻、磨浆、调节pH、抽提、离心分离、超滤、纳滤、脱盐、浓缩、过滤除菌、冷冻干燥、分装制品步骤。

其中所述离心为离心力大于3000g的离心，优选为大于10000g的离心，更优选为大于20000g的离心。

在本发明的一个优选方面，磨浆后进行抽提，抽提前对磨浆液进行pH调整，pH可以调节为6.0-8.0，例如pH为6.2-7.8、6.4-7.8,合适的pH为6.5-7.5，优选为6.8-7.5。调pH值是因为蝇蛆的活性多肽绝大多数溶解在液体中，便于与水不溶物分开。调节pH可以用常用的酸或碱溶液。

在本发明的一个具体方面，本发明所述的方法包括如下步骤：