[发明专利]一种球孢白僵菌的液体固体培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物发酵方法领域，尤其是涉及一种虫生真菌球孢白僵菌Bcauveria Bassiana(以下简称白僵菌)的固体培养方法。

背景技术

白僵菌是一类对农林害虫寄主范围广且致病性强的昆虫病原真菌，在农林害虫生物防治研究与应用中占有非常重要的地位。由于白僵菌具有对环境和脊椎动物无害，易培养、杀虫谱广、致病力强等特点，是目前应用最非常广泛的生物农药，在多种农林害虫的生物防治中都取得了非常明显的成效。

目前，国内外白僵菌生产主要采用液-固双相发酵工艺，即首先经过液体发酵得到白僵菌芽生孢子或菌丝体，再将其接种于固体料上继续培养，以获得分生孢子。目前我国固态发酵阶段大多数生产厂家采用浅盘、纱窗等开放式生产模式，生产过程存在着对温、湿度要求高，发酵过程周期长，易感染染菌，产品质量不稳定等缺点，严重影响了白僵菌生物农药的生产及防治效果。

发明内容

本发明设计了一种球孢白僵菌的液体固体培养方法，其解决的技术问题是现有液-固双相发酵工艺存在着对温度、湿度要求高，发酵过程周期长，易感染染菌，产品质量不稳定等技术缺陷。

为了解决上述存在的技术问题，本发明采用了以下方案：

一种球孢白僵菌的液体固体培养方法，包括以下步骤：步骤1、液体菌丝阶段：采用液体深层发酵培养；步骤2、固体菌丝培养阶段：步骤1待获得大量菌丝体后，转入固体发酵罐进行培养，固体发酵罐中放有固体培养料；步骤3、开放产孢阶段：待步骤2中固体发酵罐长满菌丝体后，将固体培养料扣出，采用开放式发酵最终得粗粉剂。

进一步，所述步骤2固体菌丝培养阶段的培养周期为1-2天，培养温度设定为24±1℃。

进一步，所述步骤3中开放产孢阶段的培养周期为4-5天，培养温度设定为25±2℃。

进一步，所述固体培养料的配方：以重量百分比为单位，其中甘蔗糖液1-5％，稻糠4-8％，豆粕2-4％，麦麸26-30％，余量为水。

进一步，所述固体发酵罐在培养前需进行消毒。

进一步，开放产孢阶段所用的容器为底部是布满20目小孔的不锈钢盘。

该球孢白僵菌的液体固体培养方法与传统的球孢白僵菌的培养方法，具有以下有益效果：

(1)本发明由于培养白僵菌的固体培养料配方简单，原料主要为农副产品，价廉，成本低，制作简单。同时又促进了农业废弃物得以有效利用。

(2)本发明的分阶段固体培养白僵菌的方法，是针对白僵菌生长的特点而设计，在菌丝生长阶段，需要较高湿度，使用密闭的培养容器，可始终保证培养料和培养环境的湿度较高，从而满足菌丝生长需要，这样克服了开放式培养中湿度无法控制的缺点。同时，因白僵菌生产中，杂菌污染多出现在早期菌丝生长的阶段，密闭式培养，可大大降低污染的概率，且即使出现污染的情况，亦不会扩散蔓延。白僵菌产孢阶段，对环境湿度要求没有菌丝生长阶段高，甚至过高的湿度，会使得孢子二次萌发，从而影响产孢的进程。故产孢阶段，采用开放式培养；且因培养料已经布满白僵菌菌丝，不会出现杂菌污染情况。所以，整个固体培养过程无需调控环境湿度。

(3)本发明的白僵菌固体培养方法，工艺简单，发酵周期可缩短到6-8d，极大地提高了生产效率，同时对环境湿度要求不高，显著减少了杂菌污染概率，生产成本低廉，易控制，成功率高，产品质量稳定。可应用于实验室生产及作为众多中小白僵菌生产厂家技术升级的优选方案。具有显著的社会和经济效益。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明做进一步说明：

本发明的白僵菌的分阶段培养方法：

1液体菌种的培养，包括如下步骤：

1.1菌种：白僵菌菌种，以斜面低温保存。

1.2斜面菌种：预先将白僵菌菌种用试管斜面在25±1℃条件下传代培养、活化，当斜面表面长满孢子时即可使用。斜面培养基为微生物培养中所通用的萨氏培养基。

1.3液体培养基：使用培养基。用500ml三角瓶中装入200ml液体萨氏培养基，121℃下蒸汽高温灭菌30min，冷却后备用。

1.4接种：在无菌操作台中，从菌种斜面上挑取少量孢子及菌苔接入上述液体培养基中。

1.5摇床培养：25±1℃恒温振荡培养箱中振荡培养72h，待长成白色粘稠菌丝体后即可接入液体液体种子发酵罐培养。

1.6液体种子罐培养进行白僵菌菌丝体培养。待液体种子罐温度达到25～27℃时，即可接种，接种量7％～15％。

2固体培养，包括如下步骤：

2.1固体培养料配方及制备：