[发明专利]抗菌肽AWRK6在制备治疗败血症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于小肽药物应用领域，具体地涉及一种抗菌肽AWRK6在制备治疗败血性休克药物中的应用。

背景技术

抗生素,被广泛用于治疗由细菌引起的感染，现今已经产生了很多副作用，如导致了多重耐药菌的出现，更严重的是，抗生素抑杀细菌使细菌死亡的同时释放出大量内毒素(LPS)，释放的内毒素可引起多种慢性呼吸道疾病，包括慢性阻塞性肺疾病，哮喘，过敏性肺泡炎，也可产生内毒素休克，严重时导致死亡，仅在美国每年就有接近20万人死于败血症，由革兰氏阴性菌感染所引发的败血症目前已成为世界医学领域的一大难题。

内毒素多由细菌分裂、死亡或是抗生素治疗感染时释放出来，可作用于多种宿主细胞如嗜中性类细胞、肥大细胞和内皮细胞，是败血症的主要致病因子。具体的作用机制为内毒素与宿主血清蛋白(LPS结合蛋白)相互作用后激活单核细胞表面的LPS受体CD14，LPS-LBP-CD14复合物通过与TLR4相互作用后开启细胞内相关信号通路,激活一系列转录因子,包括ERK-1、C-Jun、NF-кB、CREB，诱导早期促炎因子(如TNF–α、IL-8、IL-1β和NO)释放，进而释放第二波促炎因子，如血小板激活因子、白三烯，这些炎症因子的过量表达会引起组织损伤、凝血障碍、多器官功能障碍综合症(MODS)等，严重时导致败血症或急性呼吸窘迫综合征，甚至危及病人的生命。因此，寻求新兴的能够阻断LPS对机体免疫系统刺激的治剂已经成为医学界必要而迫切的任务。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗由内毒素引起的败血性休克的新生代抗感染治剂。

AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)为东北林蛙抗菌肽，由18个氨基酸构成，分子量为2130.5，利用HNN法预测其为二级结构，其结构主要为α-螺旋，等电点为9.60，不稳定系数为-6.74，是具有较好生物稳定性的阳离子抗菌肽。

本发明提供的抗菌肽AWRK6可按本领域多肽的常规固相技术合成，小肽序列为SWVGKHGKKFGLKKHKKH，并采用高效液相色谱和质谱技术，鉴定小肽序列和纯度(大于98％)，冷冻干燥得到白色粉末状抗菌肽AWRK6。)

本发明，通过一系列的体内外实验对AWRK6抗内毒素活性进行评估，并进一步对其安全性进行评价，为其开发为新一代治疗由内毒素引起的败血性休克的新生代抗感染治剂提供理论基础和实验依据。

AWRK6具备良好的中和LPS的结构特征。结果表明，AWRK6在体内外均表现出了良好的中和内毒素活性，并能以剂量依赖的方式显著抑制由内毒素所诱导的炎症因子TNF-α和IL-8的释放。此外，动物实验表明，AWRK6能有效地保护肝脏免遭致死量LPS的攻击，能显著提高内毒素血症动物的生存率，起到很好的治疗效果，AWRK6对小鼠腹腔巨噬细胞无毒，高剂量的AWRK6对小鼠也未表现出任何毒副作用。

通过本发明，表明了抗菌肽AWRK6可在制备治疗败血性休克药物中的应用。特别是用于制备治疗由内毒素引起的败血性休克药物中的应用。抗菌肽AWRK6的有效剂量为2-10mg/kg/天。

附图说明

图1：AWRK6体外中和内毒素活性；

图中，**表示与只加LPS组相比表现出极显著差异(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

图2：AWRK6抑制LPS所诱导的全血中IL-8的释放；

图中，*表示与只加LPS组相比差异显著(p<0.05)，**表示与只加LPS组相比差异极显著(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

图3：AWRK6抑制LPS所诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的释放；

图中，**表示与只加LPS组相比差异极显著(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

图4：AWRK6对小鼠腹腔巨噬细胞毒性分析。

图5：不同浓度AWRK6治疗后内毒素血症小鼠生存曲线图

图中，*表示与内毒素血症组相比生存差异显著(p<0.05)，**表示与内毒素血症组相比生存差异极显著(p<0.01)，cum survival(1.0)表示存活率为100％。

图6：AWRK6和PMB治疗组小鼠生存曲线图；

图中，*表示与内毒素血症组相比生存差异显著(p<0.05)，**表示与内毒素血症组相比生存差异极显著(p<0.01)。

图7：AWRK6治疗内毒素血症小鼠时间依赖性结果。

图8：AWRK6中和内毒素血症小鼠血清中内毒素的结果图；