[发明专利]乙型肝炎病毒前S1抗原定量测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫诊断技术，具体地说是一种磁微粒作为载体的乙型肝炎病毒前S1抗原定量测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

我国是个肝炎大国，发病人数众多，仅乙型肝炎病毒感染者就达1.2亿。约占我国总人口的10%，乙型肝炎病程迁延，如得不到及时有效的治疗，将会发展为肝硬化甚至肝癌，即人们通常所说的“乙肝发展三部曲”。有资料显示，全球每年有100万人因感染乙肝病毒而死亡，占全球疾病死亡原因的第九位，可见乙型肝炎是严重危害人类健康的疾病之一。

完整的乙肝病毒为直径42nm的球形颗粒，又称为Dane颗粒，是1970年Dane发现的；病毒含有双层衣壳，外衣壳由脂质双层与蛋白质构成，HBsAg镶嵌于此层中，内衣壳含有HBcAg，HBcAg在酶的作用下降解，而释放出HBeAg；在内衣壳内部为病毒的核心部分，含有DNA和DNA多聚酶；DNA为双股环状，正股较短，负股较长，且有一缺口。负股DNA链上有4个开放读码框，分别称之为S、C、P、X区：S区中有S基因，pre-S1基因和pre-S2基因，分别编码HBsAg、PreS1抗原、PreS2抗原；C区编码HBcAg；P区编码多聚酶。

乙型肝炎病毒至少有三种不同的抗原，而每种抗原物质都能刺激人体产生相应的抗体，就是说抗原与抗体是配对的，乙型肝炎常见的有三对抗原和抗体。三对抗原抗体分别是乙肝表面抗原和抗体，乙肝ｅ抗原和抗体 ，乙肝核心抗原和抗体 ，但因核心抗原在血清中一般不易检出，仅其余两对半在血液中可检测出，故俗称“两对半”。近年来，前S1抗原检测要比HBeAg更反映HBV复制情况。因此，前S1抗原作为HBV病毒感染、复制的指标比HBeAg敏感，有独立检测的价值，是对HBV“五项（二对半）”标志物检测起重要补充作用。

前S1抗原在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用，它主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上。前S1抗原在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起有十分重要的作用。前S1抗原主要存在于血清中HBV表面，提示机体内含有HBV就有前S1抗原。前S1抗原与HBV-DNA，HBeAg检测率高度符合是一项十分重要的病毒复制指标，提示前S1抗原可作为HBeAg和HBV-DNA检测的补充和对照。抗HBeAb（+）慢性乙型肝炎（约占患者的30%左右）和HBV慢性无症状携带者中，前S1抗原（+）可表示病毒的复制，提示临床上只检测“乙肝五项”是不够的，补充前S1抗原的测定是十分重要的，可弥补因病毒变异和其它原因造成的HBeAg阴性的“误寻”。病毒附着于肝细胞上，最重要的介导部位是前S1抗原的氨基酸（AA）21-47片段，变异的病毒只要这一区段完好就有传染性。急性乙型肝炎患者前S1抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象，反之，前S1抗原持续阳性，将发展至慢性肝炎。因此它是HBV的感染与复制状况的重要指标。同时可作为预后及药物疗效的判断指标。

前S1抗原的传统检测方法包括酶联免疫法、胶体金法及化学发光检测法，这些方法虽然具有很多优点，但在检测的灵敏度、特异性、稳定性等方面还有待进一步提高。全自动微粒子化学发光免疫分析是在酶免疫分析基础上结合了高灵敏度的化学发光测定技术和磁性微粒分离技术，与其他方法相比，这种方法有许多独特的优点，首先它用顺磁性微粒作为固相载体，由于颗粒体积小，表面积大，扩大了反应面积，大大提高了检测灵敏度；其次由于使用全自动仪器及配套试剂，使人为因素减至最低，提高了方法的稳定性和结果的重复性，同时也使得批内差异与批间差异都较小。与放射免疫法相比，微粒子化学发光法除具有高灵敏度、高精确度、高可靠性等优点外，还具有如下优点：a.无放射性污染，稳定性好；b.特异性高；c.试剂可随用随取，测定方便迅速，可作为急诊检测项目。根据大量的实验结果以及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及其发展前景来看，该方法逐渐成为取代放射性免疫分析和酶免疫分析的首选。但是目前国内尚无生产用于前S1抗原定量检测的微粒子化学发光法诊断试剂，目前急需灵敏度和特异性较高的微粒子化学发光诊断试剂，可以作为酶联免疫试剂及胶体金等试剂的替代品，用于前S1抗原的诊断。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种具有高灵敏度和特异性，适合于临床乙型肝炎病毒的辅助诊断的微粒子化学发光法前S1抗原定量测定试剂盒及其制备方法。