[发明专利]车前子中腺嘌呤核苷的HPLC含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及采用HPLC法测定车前子中腺嘌呤核苷的含量，属于生物医药领域。

背景技术

车前子(Semen Plantaginis)为车前科植物车前Plantago asiatic L.或平车前Plantago depressa Willd的干燥成熟种子。车前子作为药用首载于《神农本草经》，其味苷、性寒、无毒，入肝、肾、肺、小肠经，具有清热利尿通淋，渗湿止泻，明目，祛痰的功效。用于热淋涩痛，水肿胀满，暑湿泄泻，目赤胀痛，痰热咳嗽。车前子具有药食同源之性，被国家卫生部列为可用于保健食品的物品名单。

尽管国内外学者广泛的研究了车前子的化学成分及其药理作用，但是仍存在尚不明确的化学成分，车前子药材质量标准还有待于进一步完善。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，在对车前子的化学成分进行进一步的深入研究的基础上，提供新的指标性成分及其含量测定方法，具体是提供一种采用HPLC法测定车前子中腺嘌呤核苷的含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

车前子中腺嘌呤核苷的HPLC含量测定方法，

色谱条件：流动相：乙腈-水体积比为5:95

流速：0.1mL/min

柱温：25℃

检测波长：255nm

进样量：20μL；

供试品溶液的制备：

精密称取干燥的车前子粉末样品适量，以甲醇为提取溶剂，提取2-4次，提取时间均为100-140min，料液比(g/ml)为1:(10-11)，回收溶剂，用体积比为5:95的乙腈-水混合溶液溶解并定容至指定体积,过滤，制成供试品溶液；

对照品溶液的制备：

精密称取腺嘌呤核苷对照品，置于容量瓶中，用体积比为5:95的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.0400-0.0410mg.mL^-1对照品溶液。

进一步地，上述的车前子中腺嘌呤核苷的HPLC含量测定方法，

色谱仪：Agilent1200高效液相色谱仪

检测器：UV检测器

色谱柱：Prevail C18(250mm×4.6mm，5mm)

色谱条件：流动相：乙腈-水体积比为5:95

流速：0.1mL/min

柱温：25℃

检测波长：255nm

进样量：20μL。

进一步地，上述的车前子中腺嘌呤核苷的HPLC含量测定方法，其特征在于，

供试品溶液的制备：

精密称取干燥的车前子粉末样品适量，以甲醇为提取试剂，提取3次，提取时间均为120min，料液比(g/ml)为1:11，回收溶剂，用体积比为5:95的乙腈-水混合溶液溶解并定容至25mL容量瓶,过0.22μm微孔滤膜，制成待测溶液。

进一步地，上述的车前子中腺嘌呤核苷的HPLC含量测定方法，其特征在于，对照品溶液的制备：

精密称取腺嘌呤核苷对照品0.00205g，纯度为98.85％，置于50.00mL容量瓶中，用体积比为5:95的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.0405mg.mL^-1对照品溶液。

本发明所用到的对照品腺嘌呤核苷为自制，纯度为98.85％，腺嘌呤核苷的制备方法如下：

(1)提取

将车前子用80％乙醇回流提取三次，乙醇用量分别为10、8、8倍(W/V)，回流时间分别为1.5h、1.0h、1.0h，合并三次提取液，回收溶剂，得到车前子粗提物。

(2)分离

将车前子乙醇粗提取物，用洗脱剂I进行硅胶柱层析，收集洗脱液并经TCL检测，合并相同组分，得到C、D，E，F四个主要部分；其中，C部分为化合物麦角甾苷富集部分，D部分为化合物腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B、野漆树苷和1-辛烯3-O-β-D葡萄糖(6→1)-β-D-木糖苷富集部分，E部分为化合物乙基葡糖苷和京尼平苷酸富集部分，F部分为化合物芹菜素-7-O-葡萄糖苷富集部分。

(3)纯化

将步骤(2)所得2个部分分别反复纯化，最后纯化得到8个化合物，它们分别是腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B、野漆树苷、乙基葡萄糖苷、1-辛烯-3-醇3-O-β-D-吡喃木糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、京尼平苷酸、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、麦角甾苷。