[发明专利]小RNA miR-20b在制备抗炎药物中的应用

说明书

技术领域

 本发明属于生物制药技术领域，涉及非编码小RNA基因miR-20b在药物上的应用，特别涉及miR-20b在制备涉及自身免疫性疾病相关药物和抗炎药物的应用。

背景技术

免疫系统稳态是维持机体正常运行的基础，其通过产生各种免疫细胞及分泌各种细胞因子和抗体来抵御外来物侵扰或调控相关免疫进程，而免疫细胞的异常分化或细胞因子的表达异常则会导致各种炎症的发生。

Th17细胞可以分泌细胞因子IL-17A和IL-17F，并表达亚系特异性转录因子RORC（小鼠中为RORγt）。在Th17细胞的产生过程中，转录生长因子-β（TGF-β）和炎症细胞因子IL-6，IL-21，IL-1β和IL-23等发挥重要调控作用。Th17细胞对于胞外病原体的清除至关重要，其中包括念球菌属和克雷伯氏菌属等病原菌，但是，在特定条件下，Th17细胞及其效应性细胞因子IL-17、IL-21、IL-22、GM-CSF和CCL20等也会引起一些自身免疫性和炎症性疾病的发生，例如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、银屑病、肠炎、过敏和哮喘等。

微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一个庞大的家族，大约为21nt（核苷酸）长度的非编码RNAs，通过转录水平或翻译水平调节基因表达从而发挥其调控作用，广泛存在于包括植物和动物在内的真核生物中。miRNAs可以影响生长发育、细胞进程（增殖、凋亡、粘附、迁移等）等，对人类癌症发生及免疫系统调节均发挥重要调控作用。

近年，miRNAs在免疫系统中的重要作用日益被揭示，已经证实miRNAs广泛参与了免疫系统的发育，以及各种淋巴细胞的分化和抗体产生。在一些炎症性疾病中，诸如类风湿关节炎、多发性硬化症和系统性红斑狼疮，miRNAs广泛参与了疾病的起始和进展。而通过干预相关miRNAs的异常表达可以有效缓解疾病的发生和发展。

我们认为通过鉴定并研究miRNAs在某些炎症中的表达及作用，可以发现一批关键的miRNAs从而可以有效提高这种炎症的诊断及治疗水平。

发明内容

本发明目的是提供一种小分子RNA基因miR-20b在制备抗炎药物中的应用，该miR-20b能够有效抑制由Th17细胞引起的炎症反应。

本发明所述的miR-20b在Th17细胞中特异性低表达，且分别给na?ve CD4⁺ T细胞转染miR-20b模拟体或miR-20b阴性对照后，miR-20b模拟体能够显著减少细胞因子白介素17A基因水平以及蛋白水平表达，且miR-20b不改变Th17细胞增殖和凋亡的水平，表明miR-20b能够有效抑制Th17细胞的分化且不依赖对细胞数量的调控。

本发明所述的应用为小RNA miR-20b在制备抗炎药物中的应用，该治疗抗炎的药物为治疗由反应性Th17细胞广泛参与并发挥重要致病作用的炎症反应的药物，如特别参与的涉及自身免疫性疾病及炎症相关的药物。

本发明提供的miR-20b由以下核苷酸组成：5’-CAAAGUGCUCAUAGUGCAGGUAG-3’。

本发明首先在体外分化由流式细胞仪分选的幼稚型（na?ve）CD4⁺ T细胞，从而得到体外分化的中性（neutral）、Th1、Th2、Th17、诱导型调节性T（Treg）细胞，并利用实时定量PCR（real-time PCR）技术分析miR-20b的表达，结果发现分别与neutral分化细胞相比，miR-20b在Th17细胞中较之Th1、Th2和Treg细胞特异性低表达。

其次，本发明中流式分选na?ve CD4⁺ T细胞，在Th17条件下分化培养，分别给细胞转染miR-20b阴性对照（miR-20b NC）及模拟体（miR-20b mimics）后，miR-20b mimics能够显著减少细胞因子白介素17A基因水平以及蛋白水平表达，表明miR-20b能够有效抑制Th17细胞的分化。

同时，本发明中流式分选na?ve CD4⁺ T细胞，在Th17条件下分化培养，分别给细胞转染miR-20b阴性对照（miR-20b NC）及模拟体（miR-20b mimics）后，检测发现miR-20 mimics在体外对Th17细胞的增殖和凋亡是没有影响的。说明miR-20b在本质上对Th17细胞的分化产生了抑制，而不会改变细胞的数量。

因此，miR-20b在制备由Th17细胞特别参与的涉及自身免疫性疾病及炎症相关的药物方面有巨大潜力。