[发明专利]一种重组SLO蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种重组SLO蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.权利要求1所述的重组SLO蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)根据SLO的基因序列设计引物，PCR扩增该基因并与pMD-18T载体连接，转染感受态大肠杆菌DH5α，筛选阳性工程菌并提取质粒做双酶切及DNA测序验证，将正确的阳性质粒双酶切获得扩增的SLO核苷酸序列并与表达质粒pGEX-2T连接，构建SLO-pGEX-2T表达质粒；

2)将构建的SLO-pGEX-2T表达质粒转染感受态大肠杆菌BL21，筛选阳性工程菌进行培养，从所得菌液中筛选出表达目的蛋白的阳性工程菌；

3)将所得的表达目的蛋白的阳性工程菌进行扩大培养后再进行诱导表达，得到表达菌液；

4)所得表达菌液离心，沉淀用bufferA溶解后再裂解，裂解后加入Lysis buffer，静置，离心，上清液透析后上DEAE-Sepharose阴离子交换柱，收集流出液，重复一次上柱操作，得到纯度大于90％的重组SLO蛋白。

3.根据权利要求2所述的重组SLO蛋白的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

1)根据SLO的基因序列设计引物，PCR扩增该基因并与pMD-18T载体连接，转染感受态大肠杆菌DH5α，涂板后筛选阳性工程菌，并对其扩大培养，然后提取质粒做双酶切及DNA测序验证，将验证正确的阳性质粒双酶切获得扩增的SLO核苷酸序列并与表达质粒pGEX-2T连接，构建SLO-pGEX-2T表达质粒；

2)将构建的SLO-pGEX-2T表达质粒转染感受态大肠杆菌BL21，涂板后筛选若干阳性工程菌，并将其分别接种于含氨苄青霉素的LB培养基中，35～40℃条件下摇床培养12～16h，之后每管加入IPTG诱导，控制IPTG的终浓度为0.1～2mmol/L，30～32℃条件下摇床诱导5～8h，收集菌液，取样做SDS-PAGE电泳检测，筛选出表达目的蛋白的阳性工程菌；

3)将所得的表达目的蛋白的阳性工程菌接种于含氨苄青霉素的LB培养基中，35～40℃条件下摇床培养12～16h，所得菌液接种于含氨苄青霉素的LB培养基中，35～40℃条件下摇床进行扩大培养，直至菌液在600nm处的吸光值介于0.7～1之间，之后将IPTG加入菌液中，使IPTG终浓度为0.1～2mmol/L，30～32℃条件下摇床诱导5～8h，得到表达菌液；

4)所得表达菌液离心，沉淀用bufferA溶解，然后将菌液进行超声波裂解，在裂解后的菌液中加入等体积的Lysis buffer，静置，离心，上清液用Dialysis buffer进行透析，透析后的上清样上DEAE-Sepharose阴离子交换柱，收集流出液，重复一次上柱操作，得到纯度大于90％的重组SLO蛋白。

4.根据权利要求2或3所述的重组SLO蛋白的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述SLO的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

5.根据权利要求2或3所述的重组SLO蛋白的制备方法，其特征在于：步骤1)中，根据SLO的基因序列设计的引物分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。