[发明专利]解淀粉芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及深海中微生物筛选及发酵领域，具体涉及解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22及其液体发酵产蛋白酶的方法。

背景技术

海洋是生命之源，人类物质资源的天然宝库。它覆盖着地球表面积的71%，海水总体积占地球总水量的97%，生物量约占地球生物总量的80%，生物种类20万种以上，蕴藏着丰富的资源。为了寻求更广泛的微生物及活性物质资源，人类将目光投向了海洋，期望寻求到符合要求的新型菌株及蛋白酶。其中，由于微生物几乎能分泌所有现今已知的酶类，并且微生物来源的酶制剂，相比于木瓜、猪胰脏等动植物来源的酶制剂有其不可替代的优势，因此对微生物菌株及其活性物质的利用已成为了研究的热点。

蛋白酶（Protease）属于水解酶类，是最重要的三大工业用酶之一，销售额约占全球酶制剂市场的60%。如今，在酶类市场中，在碱性条件下具有稳定活性的碱性蛋白酶占据了最大的份额。其应用已经深入到食品、酿造、医药、纺织、皮革、日用化学、洗涤剂、饲料以及水产加工等多个行业，对国民经济的发展起着重要的作用。目前，已被结晶和纯化的蛋白酶超过100种。

正是由于海洋中所具有的低温、高盐、高压的环境，使得海洋中的微生物及其所产的胞外酶具有陆生微生物所不具备的特性。通常，海洋微生物所产酶具有作用pH范围宽，最适pH和反应温度适中，温度对蛋白酶活力影响小等特点。因此，从中国南海的深海海泥中筛选出了能分泌特殊性能或研究价值较高的蛋白酶的微生物菌株，并探讨了其发酵性能和条件。

发明内容

本发明目的之一是提供了一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。

本发明目的之二是提供了一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22在液体发酵生产蛋白酶的应用。

本发明中可生产蛋白酶的深海菌株，为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22，该菌于2013年11月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 8425。

对保藏号为CGMCC No. 8425的菌株进行形态学及生理生化鉴定，有以下特征：（1）菌落形态：白色，形状不规则，表面有颗粒感，乳头状凸起，不透明，边缘呈波状；（2）细胞形态：直杆状，链状排列，周生鞭毛，革兰氏阳性；（3）生理生化特征：可在4-40℃环境中生长，好氧，能耐受7%（wt）氯化钠，能水解明胶、淀粉、酪素、柠檬酸盐，能利用硫酸铵、硝酸铵，可利用果糖、葡萄糖、甘露醇、木糖为碳源，吲哚反应、V.P.反应、甲基红试验、接触酶和氧化酶试验为阳性，能产过氧化氢酶，不产硫化氢。

保藏号为CGMCC No. 8425菌株经16S rDNA鉴定，测得基因片段长度为1449bp，具体基因序列见序列表1。将获得的基因序列输入Genbank，应用Blast程序将获得的基因序列与数据库中基因序列进行对比。结果显示与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的16S rDNA序列同源性为99%。将此结果结合菌株形态学及生理生化鉴定特征，确定该菌为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。

保藏号为CGMCC No. 8425菌株通过单因素试验对其液体发酵产蛋白酶条件进行了优化。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和技术效果：本发明公开了解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产蛋白酶的条件，其培养、发酵条件简单，遗传性质稳定。由于该菌株来源于深海，所分泌蛋白酶具有特殊的性质，并且关于该菌株的文献报道较少，在开发新型深海菌株及酶制剂的研究中，具有重要意义。

附图说明

图1为不同种子液培养时间对解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产蛋白酶的影响曲线。

图2 为不同装液量对解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产蛋白酶的影响曲线。

图3 为不同发酵温度对解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产蛋白酶的影响曲线。