[发明专利]和厚朴酚抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的应用

说明书

技术领域

本发明属生物医药领域，具体涉及和厚朴酚抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的应用。

背景技术

细菌引发的感染已成为感染性疾病的主要原因之一, 具有耐药性和难治性的特点, 而且还可以对抗机体的免疫清除作用, 对人类和动物的健康造成很大的危害, 也给人们生活的其他方面带来了越来越严重的影响, 引起了基础和临床研究的极大关注。细菌生物被膜是指由附着于惰性或者活性实体表面的细菌细胞和包裹着细菌的水合性基质所组成的结构性细菌群落。细菌生物被膜广泛存在于含水和潮湿的各种表面上，包括自来水管道，工业管道、通风设备、医疗器械甚至病理状态下的人体组织器官，据专家估计几乎所有的细菌在一定的条件下都可以形成生物被膜。特别是生物医学材料如静脉插管、人工心脏瓣膜、人工关节表面均易形成生物被膜。据报道，生物被膜可提高细菌对杀菌剂的抵抗能力50-5000倍。葡萄球菌属细菌生物被膜已成为引起很多严重感染久治不愈和反复发作的重要原因之一。更重要的是约65%的人类细菌性感染是由生物被膜引起的。因此寻找一种可以有效抑制金黄色葡萄球菌生物被膜生长，并且可以安全使用的物质具有重大作用和意义。

厚朴酚及其异构体和厚朴酚是由一苯丙素的侧链和另一苯丙素的苯核聚合而成的二聚体，称之谓新木脂素，在樟科植物中发现较多，为中药厚朴抗菌消炎的有效成分。

发明内容

本发明的目的是为解决葡萄球菌属细菌生物被膜引起很多严重感染久治不愈和反复发作的问题，而提供一种抑制葡萄球菌生物被膜的药物，和厚朴酚。

和厚朴酚在制备抑制葡萄球菌生物被膜的药物中的应用；

所述的葡萄球菌为金黄色葡萄球菌。

和厚朴酚在制备治疗感染葡萄球菌久治不愈和反复发作疾病的药物中的应用。

本发明提供了和厚朴酚在制备抑制葡萄球菌生物被膜的药物中的应用，利用药物敏感性实验分别测定和厚朴酚对金黄色葡萄球菌浮游菌和生物被膜的抑制效果，再通过绘制杀菌曲线、结晶紫半定量法进一步验证和厚朴酚的抑制效果。另外，通过对细胞间多糖黏附素（PIA）合成和胞外DNA（eDNA）释放的影响及其对编码纤连蛋白结合蛋白基—fnbA和fnbB转录水平的考察，说明和厚朴酚对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜生长具有良好的作用。

附图说明

图1时间―杀菌曲线实验结果；(◆)空白; (                                                ) 4 μg/ml ; (▲) 8μg/ml; () 16 μg/ml () 32μg/ml；

图2纸片扩散法实验结果；

图3结晶紫半定量实验结果；

图4 PIA实验结果；

图5 eDNA实验结果；

图6 fnbA和fnbB转录水平检测实验结果。

具体实施方式

本发明中受试菌包括：9株临床株，以及1株对照用质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 29213。

天然化合物和厚朴酚，分子式为C₁₈H₁₈O₂，分子量为266.33，其化学结构为：

和厚朴酚

实施例1

微量稀释法药物敏感性实验：用MHB培养基将和厚朴酚贮存液稀释倍比稀释，每孔100 μL加入96孔板。将过夜培养的取菌液用MHB 培养基稀释至OD600为0.4（相当于5×10⁸ CFU/mL），并进一步稀释至浓度为10⁶ CFU/mL。每孔加100 μL菌悬液，以MHB 作阴性对照，不加药物的菌悬液为阳性对照。混合均匀后放37℃温箱静置培养，24 h后观察结果。能抑制细菌生长的最低浓度为菌株的MIC值，将每孔的细菌吹打均匀后倒入MHA平板，不长菌的最低浓度为MBC值，试验重复3次，取中位数为最终值。和厚朴酚对金黄色葡萄球菌悬浮菌（见表1）

实施例2