[发明专利]检测阿德呋啉的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测阿德呋啉的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物源性食品中如鸡肉组织、内脏中的阿德呋啉含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

阿德呋琳属核苷酸类化合物，英国科学家在上个世纪七十年代有相关研究报道，在我国是一种正在研发的新型高效抗球虫药物。阿德呋啉针对球虫有良好的治疗效果，其抗球虫指数ACI为183.2。将一定量的阿德呋啉药物饲养罗曼雄性雏鸡，可明显检测到鸡肝和鸡肾中阿德呋啉以原药形式存在。以昆明种健康小氣考察阿德呋啉的急性毒性试验，口服给药，给药一次或24h内多次给药后，一定时间内所产生的毒性反应及死亡过程得出阿德呋啉LD₅₀为3443.5mg?Kg^-1?bw^-1最高剂量给药后，小鼠精神沉郁、呼吸急促。剖检部分死亡小鼠发现腹腔液较多，药物吸收不完全，脾脏肿大。目前在家禽等动物中都没有阿德呋琳的相关研究报道，为了完成新兽药申报，建立阿德呋啉药物的安全评价，保障食品安全，所以开展阿德呋啉的检测研究。

近年来，水、食品安全、卫生、公共健康和能源等与大众的生活息息相关的问题，也越来越受到全球的关注，见附录1。世界各国针对食品安全问都幵展研究解决办法。欧盟从2006年1月1日起开始执行新的食品安全法规，其中特别要求进口食品必须符合新法规的标准，否则欧盟委员会有权取消其进口资格。随着兽药在畜禽词养过程中的长期大量使用，防止滥用药物具有重要意义。在西方经济发达的国家，人们十分重视兽药残留的监控，颁布了一系列畜产品中兽药残留限量标准和管理法规，严格实施对畜产品中兽药残留的监督、监控与检测，制定了详尽的兽药残留检测方法。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的阿德呋啉抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测阿德呋啉的化学发光免疫试剂盒，将为鸡肉产品中阿德呋啉药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中阿德呋啉含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中阿德呋啉含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测阿德呋啉的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有阿德呋啉-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述阿德呋啉-载体蛋白偶联物是将阿德呋啉与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、阿德呋啉标准品；

3、阿德呋啉-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的阿德呋啉抗体，所述阿德呋啉抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；

4、发光底物液：该发光底物液是以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液，分为A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位发光增强剂加鲁米诺货发光增强剂加异鲁米诺，B液为过氧化氢溶液或尿素过氧化氢溶液；

5、2倍浓缩稀释液；

6、20倍浓缩洗涤液。

本发明中，所述的不透明白色酶标板为96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶标板。

本发明中，所述的阿德呋啉标准品，由一系列不同浓度的阿德呋啉标准品组成，浓度为0.02~5.12ng/mL的浓度区间。

本发明中，所述的阿德呋啉-过氧化物酶标记抗体为用过氧化物酶标记的阿德呋啉抗体，如辣根过氧化物酶(HRP)标记的阿德呋啉抗体。

本发明中，所述的发光底物液为商品化的任一种以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液。

本发明中，所述所述2倍浓缩稀释液，其成分为0.01mol/L，pH7.4的磷酸缓冲液、甘氨酸-HCl缓冲液或Tris-HCl缓冲液，使用前请按1：1稀释（1份浓缩样品稀释液+1份去离子水）。

本发明中，所述20倍浓缩洗涤液，其包含0.05%吐温-20，0.01mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间，使用前请按1：19稀释（1份浓缩稀释液+19份去离子水）。

本发明的阿德呋啉的化学发光免疫检测试剂盒应用于阿德呋啉的检测时，检测步骤为：