[发明专利]苏云金芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及深海中微生物筛选及发酵领域，具体涉及苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07及其液体发酵产蛋白酶的方法。

背景技术

蛋白酶（protease）是一类非常重要的水解酶，是三大工业用酶之一，销售额约占全球酶制剂市场的60%。其中，来源于细菌的蛋白酶比来源于动物和真菌的更具有开发前景，因为，微生物无处不在，可以在有氧和无氧环境中生存，且生长速度快，它们的代谢产物――微生物酶，可以降解所有天然化合物及大多数人造化学品。所以微生物酶已成为人们获得工业用酶的重要来源，其中微生物来源的蛋白酶占据了世界市场的20%，主要用于蛋白质深加工、皮革、医药、洗涤剂、饲料等行业中。

由于海洋环境的特殊性（高盐、高压、低温、营养稀缺等），使海洋微生物与陆生微生物在代谢系统与防御体上有着明显的差异，其所拥有的独特遗传因子与代谢途径，能够产生化学结构多样、新颖，生理活性独特的代谢产物。是获取新型酶，如极端酶，特别是耐盐、耐碱、耐热、耐冷蛋白酶的重要资源库。此外，人类对生物活性物质的需求越来越迫切，开发新颖的活性物质也成为当前研究的热点。但由于我们对深海微生物的特殊生长需求以及生理特性的了解有限，所以我们能在现有的实验室条件下分离进行培养的还比较少。目前，在100万种以上的海洋微生物中，所研究和鉴定过的海洋微生物约占总数的5%，已发现的活性物质仅约占总数的1%。这些都充分说明了海洋微生物具有深远的开发意义和巨大的开发潜力。

长期以来，苏云金芽孢杆菌都被定位于生物农药（对人、畜、植物无毒、无致病性），而关于其生长过程中所产代谢产物具有的新功能的研究报道却较少，而深海来源产蛋白酶的苏云金芽孢杆菌尚未见报道。本发明中所涉及的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07遗传性质稳定，所产中性蛋白酶活力达1000U/mL以上，在新型酶制剂的开发及工业应用中具有重要意义。

发明内容

本发明目的之一是提供了一种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。

本发明目的之二是提供了一种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07在液体发酵生产蛋白酶中的应用。

本发明中可生产蛋白酶的深海菌株为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07，该菌于2013年１１月１日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.8423。

对保藏编号为CGMCC No.8423的菌株进行形态学及生理生化鉴定，有以下特征：

表1 菌株形态特征

注：“+”表示90%以上菌株呈阳性，“-”表示90%以上菌株呈阴性，表2同。

表2 生理生化特征

 保藏号为CGMCC No. 8423菌株经16S rDNA鉴定，测得基因片段长度为1295bp，具体基因序列见序列表1。将获得的基因序列输入Genbank，应用Blast程序将获得的基因序列与数据库中基因序列进行对比。结果显示与苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的16S rDNA序列的同源性为99%。将此结果结合菌株形态学及生理生化鉴定特征，确定该菌为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。

保藏号为CGMCC No.8423菌株通过单因素试验对其液体发酵产蛋白酶条件进行了优化。

本发明具有如下优点和技术效果：

本发明公开了苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07及其产蛋白酶的条件，其培养、发酵条件简单，遗传性质稳定。由于该菌株来源于深海，所分泌蛋白酶具有特殊的性质。并且长期以来，苏云金芽孢杆菌都被定位于生物农药（对人、畜、植物无毒），而关于其生长过程中所产代谢产物具有的新功能的研究报道却较少，在开发新型深海菌株及酶制剂的研究中，具有重要意义。

附图说明

图1为不同发酵温度对苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）SWJS07产蛋白酶的影响。