[发明专利]一种邻苯基查尔酮类化合物在荧光探针中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及荧光探针领域，更具体地，涉及一种邻苯基查尔酮类化合物在荧光探针中的应用。

背景技术

微管作为细胞骨架的主要组成成分，在维持细胞形态，细胞分裂，信号传导以及物质运输等过程中起着重要的作用。细胞内微管一直处于高度动态的过程，不断的解聚成微管蛋白和聚合成不同长度的微管，使得微管和游离的微管蛋白在细胞内维持着动态平衡的状态，而且这种平衡状态会应细胞所需向微管或者微管蛋白方向移动，从而引起细胞在不同应激状态下所含微管和微管蛋白的比例有所不同。有效检测细胞内微管与微管蛋白，对研究特定条件下，微管蛋白及微管的功能与行为规律，以及临床诊断等方面，均具有重要的意义。

目前已有用于监测微管的荧光分子的报道。比如紫杉醇类化合物只能结合在微管上，由紫杉醇衍生而出的荧光分子（如BODIPY FL paclitaxel，Oregon Green® 488 Taxol）可以用于对微管的定位和定量；而长春新碱类化合物也只能结合在微管阳极端点处，由长春新碱衍生出的荧光分子（BODIPY FL Vinblastine）也被报道可以用于对微管的定位和定量；另外，微管蛋白特异抗体也常被用于免疫荧光法对微管蛋白及微管进行显影分析。这些荧光分子的发现为细胞内微管的检测提供了有利的工具。但是，由于这些探针分子即可作用于微管蛋白，也可作用于微管蛋白所形成的微管，因此无法对二者进行有效的区分。虽然文献曾报道秋水仙碱可以特异性的结合于游离的微管蛋白，但该分子具有荧光强度比较弱的缺点；后来也发现了氚标记的秋水仙碱用于微管蛋白的定位和定量，但是这些分子的合成比较繁琐而且放射元素标记具有危险性，使得其应用受到了限制。因此发现新的特异性结合游离微管蛋白的荧光分子具有迫切的需求。

发明内容

本发明提供一类荧光探针，我们发现的这类荧光分子既可以实现对游离微管蛋白的识别和定量，同时也具有合成简单，荧光性强，染色过程简易等优点。此外这类分子可以用于其他与微管蛋白结合有关的实验，如筛选微管蛋白聚集抑制剂，同时可以用于研究细胞内微管蛋白的分布与含量的变化，如用于不同肿瘤细胞和耐药细胞以及细胞EMT发生前后微管蛋白分布和量的变化检测。

本发明首先提供一种邻苯基查尔酮类化合物在荧光探针中的应用，所述的苯基查尔酮类化合物的结构式为

R₁为OH或H，R₂为-OCH₃或N(CH₃)₂，R₃为H或F，R₄为H或F。

所述的荧光探针为对微管蛋白进行特异性检测的探针。

所述的应用为邻苯基查尔酮类化合物在制备肿瘤中的微管蛋白的荧光探针中的应用。如用于不同肿瘤细胞和耐药细胞以及细胞EMT发生前后微管蛋白分布和量的变化检测。

所述的应用为邻苯基查尔酮类化合物对游离微管蛋白的识别和定量检测。

所述的荧光探针用于细胞体外和/或细胞体内的微管蛋白的检测。

所述的荧光探针用于筛选可与微管蛋白结合的分子。

所述的荧光探针用于制备微管蛋白检测试剂。

本发明的荧光探针本身只具有微弱的荧光，但当与微管蛋白结合后，产生强荧光发射，并具对微管蛋白具有浓度依赖性；同时，本发明提供的分子，与细胞内其它小分子，生物大分子以及由微管蛋白所形成的微管，不发生明显的荧光增强现象，具有优良的选择性。可用于生物体系中微管蛋白的特异性检测，显像，以及与之相关的临床诊断。

本发明具有以下用处：

1. 用于体外模型中微管蛋白的特异性检测、显像与变化规律研究；

2. 用于细胞内微管蛋白的特异性检测、显像与变化规律研究；

3. 用于肿瘤细胞内微管蛋白的特异性检测、显像与变化规律研究；

4. 用于涉及到细胞内微管蛋白的特异性检测、显像与变化规律研究的临床诊断。

本发明涉及的荧光探针具有以下优点：

（1）合成路线简单，容易获得，该类荧光分子制备方法已公布在申请的专利中（申请号：201410032845.9）；

（2）具有长的荧光发射波长（>500nm）能够有效避免来自生物大分子背景荧光的干扰；

（3）该探针分子本身无荧光，只有与微管蛋白结合后才具有很强的荧光，因此检测信噪比高，灵敏度高；