[发明专利]一种检测脂肪酶酶活的荧光分析法

权利要求书

1.一种检测脂肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)采用巯基乙酸甲酯作为脂肪酶的底物，Tris-HCl缓冲溶液调节底物溶液的pH值；

(2)得到脂肪酶酶活的动力学曲线：向步骤(1)中调节好pH的反应液中加入不同浓度的脂肪酶溶液，混匀，调节反应温度，反应一段时间后，用移液枪移取适当体积的脂肪酶水解液，向其中依次加入硫化钠和氯化镉溶液，混匀后在激发波长为350nm，发射波长范围为400-620nm，最大发射波长为470nm处直接测定其荧光强度；根据水解时间的不同，以荧光强度的大小为纵坐标，反应时间为横坐标，绘制脂肪酶酶活的动力学曲线；

(3)得到脂肪酶酶活检测标准曲线：将巯基乙酸甲酯溶液分别加入到不同浓度脂肪酶溶液中，在适宜的温度和pH条件下分别反应相同的时间后，用移液枪取出一定体积的反应液，向其中依次加入硫化钠和氯化镉溶液，混匀、测定其荧光强度；以荧光强度的大小作为纵坐标，脂肪酶的浓度作为横坐标，绘制标准曲线。

2.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，所述步骤(1)中加入缓冲溶液将巯基乙酸甲酯的pH值调至8.0。

3.根据权利要求1所述的检测脂 肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，所述步骤(2)中，反应温度为20-50℃；加入的待测脂肪酶溶液的最终浓度为1.0mg/mL。

4.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，所述步骤(2)中，脂肪酶水解液中加入硫化钠和氯化镉的摩尔比为1∶5。

5.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，所述步骤(3)中，酶水解时间为15min。