[发明专利]一种快速检测防腐剂苯甲酸超标的试纸条

说明书

技术领域

属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有还超标物质的检测方法，特别是一种苯甲酸试纸检测方法。

背景技术

苯甲酸又名苯酸或安息香酸，与水杨酸合用于成人皮肤真菌病，浅部真菌感染如体癣、手癣及足癣等，也用于定香剂或防腐剂。人经口500mg/kg即会出现急性中毒现象；人经口6mg/kg最低中毒量，可有皮肤损害。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的苯甲酸快速试纸定量检测方法。

本发明的目的可通过以下技术方案来实现：

苯甲酸免疫层析试纸检测方法其技术要点是：试纸的被衬上依次贴有样液吸收部分和胶体金标记部分和检测反应部分和吸水部分，胶体金标记部分被标记的物质为苯甲酸检测用抗体；检测反应部分上面包被有苯甲酸抗原1条作为检测线，同时还包被有羊抗鼠IgG抗体1条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。

所述的检测用抗原是指苯甲酸与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指苯甲酸与载体物质是孔血蓝蛋白（KLH）形成的偶合物。

所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。

本发明所描述的试纸的各部分处理与功能如下：

被衬：为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样液吸收部分制备：将聚酯膜或玻璃纤维纸浸入pH7.4的PBS中约2min，取出，45℃左右烘干，即作为样液吸收部分，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动。

胶体金标记部分的制备：该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用。制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记苯甲酸抗原或苯甲酸抗体。胶体金标记部分处理。

（1）胶体金溶液的制备：将氯金酸（HAuCl₄）用超纯水配制成1%的溶液。取超纯水1000mL，加热至沸腾，加入10mL1%氯金酸溶液，再次加热至沸腾。然后加入10mL2%的柠檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。

（2）胶体金标记苯甲酸抗体：将苯甲酸单克隆抗体或多克隆抗体用PBS（0.01mo1/L，pH7.4）溶解稀释至2-4mg/ml，每100mL胶体金溶液加入1-3mL2-4mg/ml的苯甲酸抗体震荡2min，用0.1mol/L的K₂CO₃，调节pH至8.4，震荡5min，加入11%PEG-100002mL，震荡5min，6000-13000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）复溶，以8000-15000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）稀释500-2000倍，产物作为金标苯甲酸抗体。

（3）胶体金标记部分处理：将稀释后的金标苯甲酸抗原或金标苯甲酸抗体倒入一槽中，将玻璃纤维或滤纸浸入1min，取出，37℃干燥后，即作为胶体金标记部分。

检测反应部分制备：用0.8%的戊二醛溶液或0.2%的碳二亚胺溶液浸泡硝酸纤维膜30min，取出，37℃烘干，上边包被1条不同浓度的苯甲酸检测用抗原线或苯甲酸抗体线作为检测线，同时包被1条羊抗鼠IgG抗体线作为参考线。当胶体金标记部分标记对象为苯甲酸检测用抗原时，检测线则包被苯甲酸抗体。此即为检测反应部分，该部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水部分制备：将玻璃纤维纸或滤纸或吸水纸室温干燥后，即作为吸水部分。该部分主要作用在于将移动上来的多余的样品溶液吸收。

试纸组装：在背衬上依次粘贴样液吸收部分、胶体金标记部分、检测反应部分和吸水部分，即成苯甲酸检测试纸。

检测原理：检测原理因胶体金标记的对象不同，而稍有差异。