[发明专利]一种检测磺胺多残留的ELISA试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术领域，特别是检测磺胺多残留的酶联免疫试剂盒。

背景技术

磺胺多残留类药物是一类具有广谱抗菌活性的化学药物，具有廉价、使用方便的特点，广泛应用于兽医临床及动物饲料添加剂等领域。磺胺类药物经过各种给药途径进入动物体内后，可转移到肉、蛋和乳等动物性食品中，如果使用不合理很容易在动物组织中造成磺胺类药物残留。

人类经常食用有磺胺类药物残留的动物性食品，就可能引起磺胺类药物在体内的逐渐蓄积，其危害性主要表现为变态反应与过敏反应、细菌耐药性、致畸作用、致突变作用、致癌作用以及激素样作用。同时，磺胺类药物残留也是目前动物性产品贸易的主要技术问题，严重影响了畜牧业的正常发展。因此，为了保障动物用药的安全性和有效性，以及人类摄食动物性食品后的安全性，许多国家规定了磺胺类药物残留的最高残留量（MRL）。加拿大、欧盟、美国规定动物组织中的磺胺类药物总量的最大残留量是100ug/Kg,日本为20ug/Kg。根据我国农业部1998年制定的“兽药及其它化学物质在动物可食性动物组织中的允许残留量标准为100ug/Kg-300ug/Kg。

目前，磺胺多残留类的测定方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法、高效液相色谱-质谱联用法等，其检测结果准确可靠，但仪器设备比较昂贵，且样本前处理过程相对复杂。酶联免疫吸附法是一种准确、可靠、快速、特异的检测方法，适合于大批样品的快速筛选，近年来已广泛应用于食品安全检测行业。本发明旨在建立一种检测磺胺多残留的酶联免疫试剂盒及其检测方法。

发明内容

为了克服色谱法的不足，本发明提供一种检测磺胺多残留类的酶联免疫试剂盒及其检测方法。该方法灵敏、准确、快速，操作简便、特异性强，适用于大批样品的快速检测。

发明内容

本发明检测磺胺多残留类的酶联免疫试剂盒，包括酶标板、磺胺多残留类标准品、磺胺多残留类抗体工作液、磺胺多残留类酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液。

本发明检测磺胺多残留类的酶联免疫试剂盒的制备，包括以下步骤：酶标板的制备、磺胺多残留类标准品的制备、磺胺多残留类抗体工作液的制备、磺胺多残留类酶标二抗工作液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备、浓缩稀释液的制备和浓缩洗涤液的制备。

其进一步特征在于：所述的酶标板经由磺胺多残留类抗原包被制备，具体步骤是将磺胺多残留类半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联得到包被抗原，用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液，将磺胺多残留类包被抗原稀释成1：100000比例，100μL/孔，37℃避光孵育2h，取出酶标板甩掉板内液体，加入经稀释的浓缩洗涤液300μL/孔，洗板2次，30s/次，然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭液，150μL/孔，37℃放置1.5h，甩掉封闭液直接拍干，拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干，抽检合格后将酶标板真空密封于4℃条件下保存。

磺胺多残留类标准品浓度分别为0ng/mL、0.5ng/mL、1.5ng/mL、4.5ng/mL、13.5ng/mL、40.5ng/mL。

所述磺胺多残留类抗体工作液是采用磺胺多残留类人工抗原免疫小鼠得到单克隆抗体，用抗体稀释液稀释成1：30000比例制备。

所述磺胺多残留类酶标二抗工作液由酶标二抗加稀释液稀释成1：2000比例，所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液，所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液，所述终止液为2mol/L的硫酸，所述浓缩稀释液是10倍浓缩稀释液，为0.1mol/L的PBS，pH值范围7.0-7.5之间，所述浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，为含0.5%吐温-20，0.1mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间。

检测磺胺多残留类的酶联免疫试剂盒及其检测方法，基于抗原抗体的间接竞争酶联免疫反应原理，该方法包括以下步骤：

(1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，并将其复溶于样品稀释液中；

(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；