[发明专利]DNA标签、PCR引物及其应用

权利要求书

1.一组DNA标签，其由SEQ ID NO：79-129所示的核苷酸构成。

2.一组PCR引物，其由SEQ ID NO：1-78所示的核苷酸构成。

3.一组标签PCR引物，其是通过将选自权利要求1所述的一组DNA标签中的任意一种连接至权利要求2所述的一组PCR引物的5’末端而获得的。

4.一种构建核酸测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将DNA样品进行PCR扩增，以便获得PCR扩增产物，其中所述PCR扩增采用权利要求3所述的一组标签PCR引物进行；以及

纯化回收所述PCR扩增产物，所述PCR扩增产物构成所述核酸测序文库。

5.一种确定DNA样品耳聋基因是否存在突变的方法，其中所述耳聋基因为GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因和12S rRNA基因，其特征在于，包括以下步骤：

根据权利要求4所述的方法，构建所述DNA样品的核酸测序文库；

对所述核酸测序文库进行测序，以便确定所述DNA样品的核酸测序文库的序列信息；以及

基于所述DNA样品的核酸测序文库的序列信息，确定所述DNA样品耳聋基因是否存在突变。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在进行所述测序之前进一步包括：将所述核酸测序文库依次进行末端修复、连接接头以及纯化回收连接产物的步骤。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用高通量测序技术进行所述测序，优选Solexa、SOLID、单分子、454、Ion Proton^TM和Ion PGM^TM测序平台的至少之一，更优选Ion Proton^TM或Ion PGM^TM。

8.根据权利要求5所述的方法，基于所述DNA样品的核酸测序文库的序列信息，确定所述DNA样品耳聋基因是否存在突变，进一步包括：

将所述DNA样品的核酸测序文库的序列信息与参考数据库进行比对；

基于比对结果，确定所述DNA样品耳聋基因是否存在突变。

9.根据权利要求8所述的方法，所述参考数据库为耳聋基因数据库，优选NCBI build36。

10.一种确定多种DNA样品耳聋基因是否存在突变的方法，其中所述耳聋基因为GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因和12S rRNA基因，其特征在于，包括以下步骤：

针对所述多种DNA样品的每一种，分别独立地根据权利要求4所述的方法构建所述DNA样品的核酸测序文库，其中，不同的DNA样品采用相互不同的DNA标签，所述多种为2-51种；

将所述多种DNA样品的核酸测序文库进行混合，以便获得核酸测序文库混合物；

对所述核酸测序文库混合物进行测序，以便获得所述多种DNA样品的核酸测序文库的序列信息以及所述DNA标签的序列信息；

基于所述DNA标签的序列信息对所述多种DNA样品的核酸测序文库的序列信息进行分类，以便确定所述多种DNA样品的每一种的核酸测序文库的序列信息；以及

基于所述多种DNA样品的每一种的核酸测序文库的序列信息，分别确定所述多种DNA样品耳聋基因是否存在突变。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在进行所述测序之前进一步包括：将所述核酸测序文库混合物依次进行末端修复、连接接头以及纯化回收连接产物的步骤。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，利用高通量测序技术进行所述测序，优选Solexa、SOLID、单分子、454、Ion Proton^TM和Ion PGM^TM测序平台的至少之一，更优选Ion Proton^TM或Ion PGM^TM。

13.根据权利要求10所述的方法，基于所述多种DNA样品的每一种的核酸测序文库的序列信息，分别确定所述多种DNA样品耳聋基因是否存在突变，进一步包括：

将所述多种DNA样品的每一种的核酸测序文库的序列信息，分别与参考数据库进行比对；

基于比对结果，分别确定所述多种DNA样品耳聋基因是否存在突变。