[发明专利]一种制备利西拉来的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，是一种合成的具有胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的II型糖尿病的治疗特效药-利西拉来的制备方法。 

背景技术

利西拉来，英名为：Lixisenatide，是含有44个氨基酸的多肽，结构式如下： 

肽序列为：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂

利西拉来（Lixisenatide）是由Sanofi-Aventis公司开发的1日1次皮下注射用胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂，主要用于治疗II型糖尿病，于2013年02月01日Sanofi-Aventis的利司那肽被EMEA批准，用于接受稳定剂量基础胰岛素（或联合二甲双胍）治疗不佳的II型糖尿病患者的辅助治疗以改善HbA1c和餐后血糖水平。

CN201210030151.2 中采用了纯固相顺序偶联的方法进行肽的合成。所述方法以氨基树脂为载体，采用常规顺序偶联，最终切割得到利西拉来。 

US6528486 为化合物专利，它提到的合成方法为Fmoc/tBu 策略的逐步缩合方法。 

WO2005058954 中的合成方法包括Fmoc/tBu 策略的逐步缩合方法、Boc 策略的逐步缩合方法及基因工程。 

WO2001004156 中的合成方法为Fmoc/tBu 策略的逐步缩合方法。 

由于利西拉来的合成国内外大多采用Fmoc固相合逐步缩合成法，逐步合成步骤较多，造成产物杂质种类比较多，US 20130284912特别报道了多肽杂质：Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来，Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来氨基酸序列如下： 

Di-Ser³³-利西拉来氨基酸序列：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂

Di-Ala³⁵-利西拉来氨基酸序列：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂

这两个杂质都是毒性较大的杂质之一，且与主峰分离十分困难，该杂质的存在严重影响利西拉来含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法将其去除并使其达到优质标准级别0.1%以下。本发明人研究发现，该杂质用现有技术的手段很难除去，有些方法虽可以去除部分，但去除效果不理想，难以达到优质标准级别同时容易造成利西拉来本身收率降低。

综上所述，现有利西拉来的固相合成过程中，由于合成收率低，杂质多，特别是都不能很好控制杂质Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来，不适用于工业化生产。 

发明内容

本发明人用现有的Fmoc固相逐步合成方法，制备利西拉来，发现现有技术存在的技术问题是：合成收率低，杂质多，特别是都不能很好控制杂质Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来，不适于工业化规模生产。为此，本发明人采用片段法，对利西拉来的合成方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。