[发明专利]一种检测男性不育症Katnal1基因突变位点的试剂盒及其PCR扩增方法

权利要求书

1.一种检测人类男性不育症致病基因突变的PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测男性不育症Katnal1基因中1个致病突变位点A236G的一组特异性引物中及PCR反应mix。

2.根据权利要求1，以男性不育症Katnal1基因致病位点A236G所在的Katnal1基因的第2外显子DNA序列为模板设计引物，其特征在于：针对致病位点A236G所设计的引物对中，正常模板配对引物中上游引物的3’端含有序列ATTGAC，突变模板配对引物中上游引物的3’端含有序列ATTGGC，其中3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化（LNA）修饰。

3.根据权利要求2，优选的一组特异性引物的序列分别如下所示：

正常模板配对引物A236GNF：5’-AGTTTTAAAATTGAC-3’；突变模板配对引物A236GMF：5’-AGTTTTAAAATTGGC-3’；共同的下游引物A236GR：5’-TAACAAGTCATTTAC-3’，其中，所述正常模板配对引物A236GNF和突变模板配对引物A236GMF的3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化（LNA）修饰。

4.根据权利要求3，所述正常模板配对引物及突变模板配对引物的3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化（LNA）修饰。

5.一种采用权利要求1和2检测人类男性不育症Katnal1基因中1个致病突变位点A236G的PCR扩增方法，其特征在于：PCR扩增由预变性和30-40次扩增温度循环组成，循环条件为95℃预变性10min，94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环30-40次，循环结束后72℃补齐延伸10min后反应结束。