[发明专利]一种用于测定重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于重金属免疫分析领域，更具体地说，涉及一种基于单克隆抗体的测定重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

重金属污染物是对人类威胁最大的污染物之一，具有环境持久性、生物蓄积性和三致效应等特点，其在环境、食品、纺织品中的含量分布及可能存在的潜在危害一直倍受关注。目前，传统的重金属检测方法大多采用原子吸收法、电感耦合等离子体发射光谱法、电感耦合等离子体质谱法等仪器方法。然而，这些借助仪器而进行的检测方法虽然在精确度、灵敏度方面具有一定的优势，但检测仪器昂贵、操作技术复杂、测定时间较长，使其推广普及受到一定的限制。对于重金属污染快速检测技术，目前国内外研究较多的有酶抑制法、酶传感器法和比色法等，但上述方法均有自己的缺点，难以实现快速筛查。因此，建立一种简单、快捷、安全的检测方法对重金属的分析研究与污染控制是非常必要的。

近年来发展起来的重金属免疫检测法(ELISA)，克服了上述方法的缺点，利用抗原抗体的特异性反应实现可作为抗原或抗体的污染物的检测，该方法检测灵敏度高，特异性强，目前已成功应用于重金属镉、汞、铅以及铝的检测。但是，ELISA法也有自身的缺陷，即完成一批试样的检测仍至少需要3h，不能达到快速检测的要求。在免疫检测法基础上发展的同样基于抗原抗体反应的胶体金免疫层析试纸条法，很好弥补了ELISA方法的缺陷，具有迅速快捷、灵敏准确、安全简便、试剂稳定和成本低廉等特点，可在10min内判断出污染物的有无，亦可进行定量或半定量的测定，其敏感性与ELISA相比基本相近。

将胶体金免疫层析试纸条法应用于无机重金属离子的检测，基于重金属单克隆抗体，则可实现快速定性筛查和半定量检测。但金属离子是小分子物质，既不具有免疫原性，也不具有反应原性，需要通过选择合适的双功能螯合剂螯合重金属离子并与载体蛋白偶联合成完全抗原免疫动物从而获得金属特异性单克隆抗体。因此，高效价、高特异性单克隆抗体的制备是制约免疫检测技术的瓶颈。目前，本实验室已成功制得重金属镉的单克隆抗体，使得胶体金免疫层析试纸条法用于重金属镉的测定成为可能。

发明内容

1、发明要解决的技术问题

针对现有技术将胶体金免疫层析试纸条法应用于无机重金属离子的检测中存在的难以制得重金属镉的单克隆抗体的问题，本发明提供一种用于测定重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，用以解决样品中重金属镉的定性及半定量快速检测，该试纸条检测耗时短、灵敏，性能可靠，操作简单。

2、技术方案

本发明的目的通过以下技术方案实现。

一种用于测定重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，它包括底板，所述的底板上从左至右依次设置有样品垫、胶体金结合垫、显色区域和吸水区；

所述的胶体金结合垫为玻璃纤维素膜Ahlstrom8964；

所述的显色区域包括测试线、控制线和硝酸纤维素膜载体，所述的测试线、控制线、硝酸纤维素膜载体为硝酸纤维素膜制成的Millipore135膜。

优选地，所述的免疫层析试纸条的宽度为4mm。

优选地，所述的底板为PVC板。

一种所述的用于测定重金属镉的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其步骤为：

(A)将抗Cd-ITCBE单克隆抗体与纳米胶体金颗粒结合形成带抗体标记的纳米胶体金，并喷涂在底板上形成胶体金结合垫；

(B)将抗原Cd-ITCBE-BSA包被在硝酸纤维素膜Millipore135预先划定的条带上，作为测试线(即T线)；

(C)将羊抗鼠IgG二抗包被在硝酸纤维素膜Millipore135预先划定的条带上，作为控制线(即C线)；

(D)按从左至右的顺序将样品垫、胶体金结合垫、包被有抗原的测试线、包被有二抗的控制线以及吸水纸依次粘贴在所述的底板上，在胶体金结合垫的一端粘贴MAX线，组装成胶体金免疫层析试纸条；

所述的吸水纸构成硝酸纤维素膜载体；

胶体金结合垫、包被有抗原的测试线、包被有二抗的控制线以及硝酸纤维素膜载体构成显色区域，该底板上与硝酸纤维素膜载体相邻的一端为吸水区。

优选地，在所述的免疫层析试纸条上，所述的纳米胶体金颗粒的粒径为10-20nm。

优选地，所述的抗Cd-ITCBE单克隆抗体，抗体包被浓度为5ⅹ10⁴倍稀释浓度。