[发明专利]一种用于诊断高甘油三酯血症的检测试剂板

说明书

技术领域

本发明涉及载脂蛋白A5(ApoA5)作为高甘油三酯血症(HTG)诊断的生化指标，ApoA5单克隆抗体对的制备技术，胶体金标记显色的免疫层析反应技术和利用ApoA5的抗体来诊断高甘油三酯血症(HTG)的技术领域，特别涉及一种用于诊断高甘油三酯血症(HTG)的检测试剂板。

技术背景

临床上检测血脂的项目有很多，各医院普遍检查的基本项目有总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白(Apo)B、Apo AI、脂蛋白(a)[Lp(a)]等。调查资料研究表明，高甘油三酯、高胆固醇、低的高密度脂蛋白-C(HDL-C)和高的低密度脂蛋白-C(LDL-C)共同构成了冠心病的危险因素。载脂蛋白(Apo)异常与冠心病和中风密切相关。尽早进行正确诊断，有利于早期防治这些严重的疾病。载脂蛋白检测试剂的开发，有助于冠心病和中风的有效防治。

血清ApoAI可以代表HDL水平，与HDL-C呈正相关，其临床意义也大体相似。但是，HDL是一系列颗粒大小与组成不均一的脂蛋白，病理状态下HDL亚类与组成往往会发生变化，故ApoAI的升降不一定与HDL-C变化完全成比例。ApoB100大约有90％的比例分布在LDL中，所以血清ApoB主要代表LDL水平，它与血清LDL-C水平呈明显正相关，ApoB水平高低的临床意义也与LDL-C相似。但是，在少数情况下,可出现高ApoB100血症而LDL-C浓度正常的情况，所以这两种载脂蛋白可靠性和准确性都不十分令人满意。

ApoA5属于ApoAI/CIII/AIV基因群，在肝脏表达，与HDL/VLDL有关。ApoA5基因启动子的单核苷酸变异(SNP)直接影响甘油三酯水平。实验研究表明，在表达人类ApoA5转基因的小鼠的血浆中甘油三酯的浓度下降为对照鼠的三分之一，而在缺少该基因的小鼠中却增加了4倍。ApoA5作为高甘油三酯血症的病因诊断指标具有很高的敏感性和特异性。

高水平甘油三酯可使小密低密度脂蛋白(sLDL)浓度升高，具有较强的致动脉粥样硬化作用。甘油三酯水平越高，低密度脂蛋白中的胆固醇酯越多。人们已经证实，动脉粥样硬化斑块中的胆固醇主要来自于低密度脂蛋白，低密度脂蛋白既是血浆中含胆固醇最多的，也是致动脉粥样硬化性最强的脂蛋白。另外，流行病学研究表明，高水平甘油三酯使高密度脂蛋白浓度下降，高密度脂蛋白浓度受甘油三酯水平的影响，两者呈负相关。近来研究表明，血甘油三酯水平异常与体内凝血因子异常密切相关，血浆甘油三酯水平升高可以导致体内凝血因子水平升高，从而促进血凝，并可使组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)合成增加，抑制纤维蛋白溶解，形成高凝状态，促进冠心病的发生。有实验结果表明，甘油三酯浓度上升1mmol/L，心血管意外发生率男性上升32％，女性为76％。在校正高密度脂蛋白的影响后，危险率男性上升14％，女性为37％。这些结果表明血清甘油三酯浓度升高是心血管疾病的重要危险因素。

高甘油三酯血症患者常同时有高血压和胰岛素抵抗。胰岛素抵抗通常指患者有倾向于非胰岛素依赖糖代谢异常，该类患者常较早地形成冠状动脉疾病。通常将脂质三联症、高凝状态、高血压、胰岛素抵抗称为代谢综合征。已证实高甘油三酯血症患者常合并有代谢综合征中的其它异常。高甘油三酯血症的临床意义在于此。而作为直接影响甘油三酯水平的指标ApoA5显得尤为重要，ApoA5的单核苷酸多态性有望作为风险指示标和降低血脂浓度的治疗靶点。

本发明就是将ApoA5通过单克隆抗体对的制备技术和胶体金免疫层析技术应用于临床实践以达到高甘油三酯血症的病因的快速诊断，以及冠心病和中风等心血管疾病有效防治的目的。

三明治双抗体技术是建立在单克隆抗体技术之上的生物技术领域较新的后抗体技术。双抗体夹心法应用抗体对识别抗原的两个位点来捕捉抗原，避免了抗体与抗原的同一位点的竞争结合，减少了抗原决定簇的空间位阻现象，所以较一般的抗原捕捉法更敏感，特异性更强，重复性更好，尤其适用于抗原含量很少的标本的检测。本发明结合此技术开发的针对ApoA5的抗体对，对检测HTG病人血液中微量生化指标(抗原)更突显其重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于诊断高甘油三酯血症的检测试剂板，利用载脂蛋白A5(ApoA5)作为高甘油三酯血症(HTG)诊断的生化指标，制备ApoA5的单克隆抗体对以及相应的胶体金免疫层析快速检测试剂板，检测时间仅8－12分钟，通过测定人血液中的ApoA5的浓度，而对高甘油三酯血症(HTG)进行病因诊断，从而达到冠心病和中风等心血管疾病的有效防治。

本发明的目的是这样实现的：