[发明专利]一种检测载脂蛋白A5以诊断高甘油三酯血症的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及载脂蛋白A5(ApoA5)作为高甘油三酯血症(HTG)诊断的生化指标，抗ApoA5抗体对的制备技术，酶标记显色免疫反应技术和利用ApoA5的抗体来诊断高甘油三酯血症(HTG)的技术领域，特别涉及一种定量检测ApoA5以诊断高甘油三酯血症(HTG)的试剂盒。

背景技术

临床上检测血脂的项目有很多，各医院普遍检查的基本项目有总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白(Apo)B、Apo AI、脂蛋白(a)[Lp(a)]等。调查资料研究表明，高甘油三酯、高胆固醇、低的高密度脂蛋白-C(HDL-C)和高的低密度脂蛋白-C(LDL-C)共同构成了冠心病的危险因素。载脂蛋白(Apo)异常与冠心病和中风密切相关。尽早进行正确诊断，有利于早期防治这些严重的疾病。载脂蛋白检测试剂的开发，有助于冠心病和中风的有效防治。

血清ApoAI可以代表HDL水平，与HDL-C呈正相关，其临床意义也大体相似。但是，HDL是一系列颗粒大小与组成不均一的脂蛋白，病理状态下HDL亚类与组成往往会发生变化，故ApoAI的升降不一定与HDL-C变化完全成比例。ApoB100大约有有90％的比例分布在LDL中，所以血清ApoB主要代表LDL水平，它与血清LDL-C水平呈明显正相关，ApoB水平高低的临床意义也与LDL-C相似。但是，在少数情况下,可出现高ApoB100血症而LDL-C浓度正常的情况，所以这两种载脂蛋白可靠性和准确性都不十分令人满意。

ApoA5属于ApoAI/CIII/AIV基因群，在肝脏表达，与HDL/VLDL有关。ApoA5基因启动子的单核苷酸变异(SNP)直接影响甘油三酯水平。实验研究表明，在表达人类ApoA5转基因的小鼠的血浆中甘油三酯的浓度下降为对照鼠的三分之一，而在缺少该基因的小鼠中却增加了4倍。ApoA5作为高甘油三酯血症的病因诊断指标具有很高的敏感性和特异性。

高水平甘油三酯可使小密低密度脂蛋白(sLDL)浓度升高，具有较强的致动脉粥样硬化作用。甘油三酯水平越高，低密度脂蛋白中的胆固醇酯越多。人们已经证实，动脉粥样硬化斑块中的胆固醇主要来自于低密度脂蛋白，低密度脂蛋白既是血浆中含胆固醇最多的，也是致动脉粥样硬化性最强的脂蛋白。另外，流行病学研究表明，高水平甘油三酯使高密度脂蛋白浓度下降，高密度脂蛋白浓度受甘油三酯水平的影响，两者呈负相关。近来研究表明，血甘油三酯水平异常与体内凝血因子异常密切相关，血浆甘油三酯水平升高可以导致体内凝血因子水平升高，从而促进血凝，并可使组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)合成增加，抑制纤维蛋白溶解，形成高凝状态，促进冠心病的发生。有实验结果表明，甘油三酯浓度上升1mmol/L，心血管意外发生率男性上升32％，女性为76％。在校正高密度脂蛋白的影响后，危险率男性上升14％，女性为37％。这些结果表明血清甘油三酯浓度升高是心血管疾病的重要危险因素。

高甘油三酯血症患者常同时有高血压和胰岛素抵抗。胰岛素抵抗通常指患者有倾向于非胰岛素依赖糖代谢异常，该类患者常较早地形成冠状动脉疾病。通常将脂质三联症、高凝状态、高血压、胰岛素抵抗称为代谢综合征。已证实高甘油三酯血症患者常合并有代谢综合征中的其它异常。高甘油三酯血症的临床意义在于此。而作为直接影响甘油三酯水平的指标ApoA5显得尤为重要，ApoA5的单核苷酸多态性有望作为风险指示标和降低血脂浓度的治疗靶点。

本发明就是将ApoA5通过ELISA实验应用于临床实践以达到高甘油三酯血症的病因诊断，以及冠心病和中风等心血管疾病有效防治的目的。

ApoA5的酶联免疫定量测定，绝大部分运用了二株抗体，如专利200610018747.5，一株单克隆抗体为捕获抗体，另一株单克隆抗体(或多克隆抗体)为标记抗体，形成酶联夹心法测定ApoA5。但这一方法测定ApoA5的线性范围窄，因此其测定灵敏度和准确度都受到限制。

发明内容