[发明专利]一种含自体基质细胞的生物美容制剂

权利要求书

1.一种含自体基质细胞的生物美容制剂的制备方法，其中，所述方法为通过从自体外周血中获取自体血浆和自体基质细胞，将自体基质细胞加入到自体血浆中制备成生物美容制剂，并添加了生长因子和抗氧化因子；

所述自体基质细胞由离心获取自体血浆后的30-35ml血细胞，经淋巴分离液密度梯度离心获得单个核细胞，用基质细胞无血清完全培养基重悬，按1-3×10⁶细胞/ml加入到75cm²培养瓶中15ml，于37℃，5％CO₂培养箱中生长48小时；其中，所述基质细胞无血清完全培养基含10％无血清营养添加物和10-20ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子；

48小时后对培养基质细胞换液，用10ml移液管吸弃培养液，加入10ml新鲜的基质细胞无血清完全培养基，75cm²培养瓶继续放置37℃，5％CO₂培养箱中生长72小时；

72小时后基质细胞在75cm²培养瓶中生长融合达到80％以上，用10ml移液管吸弃培养液，取5ml 1×PBS洗涤1次培养瓶底，加入2ml质量体积比为0.25％的胰酶到培养瓶中，放置37℃，5％CO₂培养箱中消化2-3分钟；消化后加入200微升胎牛血清终止消化，再加入5ml生理盐水，用10ml移液管吹打，吸至50ml离心管中，用5ml的生理盐水洗涤一次，同样加入到50ml离心管中，1200转每分钟离心5分钟收集基质细胞；

离心后用1ml基质细胞无血清完全培养基重悬，进行细胞传代培养，即1瓶75cm²培养瓶的细胞扩至2瓶75cm²培养瓶中进行培养，每瓶加入15ml基质细胞无血清完全培养基，于37℃，5％CO₂培养箱中生长48小时后换液，继续培养72小时后基质细胞生长融合达到80％以上，继续传代培养3代；

传代培养3代后用胰酶进行消化并用生理盐水洗涤2次，计数后即获得基质细胞，放置冰箱4℃存放备用；另外部分基质细胞将加入冻存液，将1ml 6×10⁶细胞/ml基质细胞放入冻存管中冻存；

所述自体基质细胞加入鼠抗人SDF1单克隆抗体和兔抗鼠IgG1-PE，染色后经流式细胞仪检测基质细胞高表达，SDF1阳性率大于80％以上；

所述制备方法中添加的生长因子仅为表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和角蛋白18中的一种以上；所述制备方法中添加的抗氧化分子仅为超氧化歧化酶、胎盘提取精华素和银杏叶提取液中的一种以上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自体血浆由抽取人自体60ml EDTA抗凝外周血，经1500转每分钟速度离心10分钟，获得的25-30ml自体血浆，放置冰箱4℃存放备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基质细胞无血清完全培养基含10％无血清营养添加物和10-20ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述胰酶含质量体积比为0.01％的EDTA。

5.一种含自体基质细胞的生物美容制剂，其中，该制剂主要由如下成分组成：

1)5ml自体血浆；

2)1ml 6×10⁶细胞/ml权利要求1-4任一项中所述的自体基质细胞；

3)200ng/ml生长因子和抗氧化分子；

装入10ml无菌的塑料针管中，共6ml，用盖子密封包装，形成生物美容制剂；

该生物美容制剂保存在4℃条件下，保质期为48小时；

所述生长因子为表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和角蛋白18中的一种以上；所述抗氧化分子为超氧化歧化酶、胎盘提取精华素和银杏叶提取液中一种以上。

6.一种根据权利要求1-4任一项所述方法制备的生物美容制剂。