[发明专利]一种鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法

权利要求书

1.一种鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，其步骤包括：(1)称取动物组织后用缓冲液将动物组织配制成质量浓度为1-5％的匀浆，并离心取上清夜；(2)测定所述上清液中蛋白质含量；(3)将所述上清液按照体积比1：1加入孵育液在37℃下孵育120min；将缓冲液按照同样方法加入孵育液后在37℃下孵育120min作为对照组；测定Ⅰ型脱碘酶活性的孵育液为50000cpm¹²⁵I-rT₃，0.1μM rT₃，15mM DTT混合物；测定Ⅱ型脱碘酶的孵育液为50000cpm¹²⁵I-T₄，1nM T₄，30mMDTT混合物；测定Ⅲ型脱碘酶的孵育液为150000cpm¹²⁵I-T₃，1nM T₃，30mM DTT混合物；(4)加入BSA溶液终止反应后沉淀离心，取上清液用放射免疫计数仪分别测定总放射性及上清液的放射性cpm值，依据下述经验公式分别计算动物组织中三种脱碘酶活性：

其中：其中SCc＝SC－BC；

BC：对照管的放射性计数；

SC：样品管的放射性计数；

SA：孵育液中反应底物的含量/TC；

TC：总放射性计数。

2.根据权利要求1所述鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，其特征在于：所述缓冲液为0.1M的pH＝7.0的PBS缓冲液，其中含有2mM EDTA，1Mm DTT。

3.根据权利要求1所述鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，其特征在于：所述步骤(4)中BSA溶液4℃的质量体积浓度为5％的BSA溶液，BSA溶液的加入量与上清液的体积比为1：1。

4.根据权利要求1所述鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，其特征在于：所述步骤(4)中加入BSA溶液后沉淀是加入了质量体积浓度为10％的TCA溶液，并在3500r/min下离心30min，TCA溶液的加入量与上清液的体积比为2：1。