[发明专利]一种柴胡药材的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种柴胡药材的质量检测方法。

背景技术

柴胡为石竹科植物，干燥根经加工制成的中药，味甘、性微温，具有归肝、胃经、清虚热、除疳热等功效，临床用于阴虚发热，骨蒸劳热，小儿疳热等病症的治疗。柴胡药材在我国已上市多年，临床效果得以广泛肯定。柴胡含多种化学成分，主要含柴胡皂苷(saikosapoins a、b、c、d四种)，甾醇，挥发油，脂肪酸和多糖等。现代研究表明柴胡含有的成分具有广泛的生理活性作用，其中柴胡皂苷a、d的含量与柴胡的解热抗炎功效密切相关，因此所含柴胡皂苷a、d含量的多少常作为柴胡药材质量控制的重要指标。

近几年柴胡的市场需求量持续增加，野生资源逐年减少，人工栽培发展缓慢，使得柴胡资源蕴藏量和产量都在大幅下降。导致市场上出现了很多伪品，其中不少伪品的农药残留量超标爆表，给柴胡药材的质量、用药的安全性及有效性带来了很大的冲击，已成为制约柴胡系列药材开发的瓶颈。

目前，正品柴胡的有效检测方法是传统的形态特征和理化特性的鉴别方法，具有一定的局限性，不足以从整体上控制柴胡的质量，作为一味临床常用中药，其真伪优劣受其理化指标、农药残留量多等诸多因素的影响，因此有必要建立一种科学的质量检测方法对柴胡的质量进行评价。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中柴胡药材检测方法复杂，质量难以调控的问题，进而提供一种准确度高，简单、快速的检测柴胡药材的方法。

为解决上述技术问题，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一种柴胡药材的检测方法，该方法包括如下柴胡皂苷a、d的含量测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中：

一种柴胡药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下柴胡皂苷a、d总量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，

A：所述柴胡皂苷a、d总量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取胡皂苷a、胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL含胡皂苷a0.4mg、胡皂苷d0.5mg的溶液，即为对照品溶液；

(2)精密称取待测柴胡药材粉末0.5g，加入含5％浓氨试剂的甲醇溶液25mL，30℃水温超声处理，滤过后用20mL甲醇分2次洗涤容器及药渣，合并洗液和滤液并回收溶剂至干；残渣加甲醇溶解并定容至5mL，滤过后取续滤液，即为供试品溶液；

(3)按照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：从0-50min，流动相A：流动相B的体积比由25％：75％→90％：10％；从50-55min，流动相A：流动相B的体积比为90％：10％；检测波长为210nm；理论塔板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；

分别精密称取对照品溶液20μl和供试品溶液10-20μl，注入液相色谱仪，测定；

B：所述农药残留量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；

(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；