[发明专利]流产嗜性衣原体巨噬细胞感染增强因子的单克隆抗体及其杂交瘤细胞

说明书

技术领域

本发明涉及一种流产嗜性衣原体MIP蛋白的单克隆抗体和能分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，属于生物检测领域。

背景技术

流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus)是革兰氏阴性专性细胞内寄生性原核生物，属于衣原体科(Chlamydiaceae)嗜性衣原体属(Chlamydophila)成员，具有广泛的宿主嗜性，主要寄生于动物的生殖道黏膜上皮细胞，能感染牛、绵羊、山羊和猪等多种动物，可引起怀孕母畜流产、早产、死胎、木乃伊胎或弱胎，公畜生殖系统炎症等多种慢性接触性传染病；并且流产嗜性衣原体也能够感染人类，导致孕妇流产，是一种重要的人畜共患病病原。

近年来，流产嗜性衣原体在我国各省区的猪群、牛群和羊群中普遍感染，由此导致的流产率最高达50％以上，成为目前畜牧业最严重的疾病病原之一，造成了巨大的经济损失。

为了有效防治流产嗜性衣原体，及时、准确、尽早的发现衣原体并进行有效的诊断是确定动物患衣原体的基础。目前针对流产嗜性衣原体，主要的检测方法是采用主要外膜蛋白(MOMP)、多型外膜蛋白(POMP)和脂多糖(LPS)等作为目的抗原，采用特异性检测LPS的直接免疫荧光检测技术，以MOMP，POMP为包被抗原的酶联免疫吸附试剂盒以及根据其编码基因ompA建立的PCR和real-time PCR技术等，具体表现成型的产品为衣原体间接血凝试验(IHA)试剂盒。

上述方法中，采用PCR技术诊断周期长、适用范围窄，不利于临床推广，无法用于大规模养殖的牛、绵羊、山羊和猪等多种动物的衣原体检测诊断。

IHA试剂盒虽然实现了规模生产和普及应用，但是存在灵敏度低，特异性较差的缺点，该类试剂盒的部分改进产品虽然灵敏度有所提高，但是生产成本过高，无法普及应用。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明公开了流产嗜性衣原体巨噬细胞感染增强因子(Macrophage Infectivity Potentiator，MIP)的单克隆抗体以及能够用于分泌生产该单克隆抗体的杂交瘤细胞，本发明的流产嗜性衣原体MIP蛋白单克隆抗体能针对流产嗜性衣原体MIP蛋白进行有效检测，具有很强的特异性，用于检测流产嗜性衣原体能提供高效及时、准确的防治信息。

为实现上述目的，本发明是通过下述技术方案实现的：

流产嗜性衣原体巨噬细胞感染增强因子(即MIP蛋白，以下均采用该缩写)的单克隆抗体，由流产嗜性衣原体MIP蛋白作为抗原免疫小鼠分泌获得，所述流产嗜性衣原体MIP蛋白具有序列表1所示氨基酸序列。

上述的流产嗜性衣原体MIP蛋白既可以通过人工合成，也可以通过大肠杆菌等原核生物对流产嗜性衣原体MIP蛋白的编码基因进行表达获得。

优选的，为了便于流产嗜性衣原体MIP蛋白质的纯化，在流产嗜性衣原体MIP蛋白的氨基末端或羧基末端连接有6×His标签。

为了大量富集和生产上述流产嗜性衣原体MIP蛋白的单克隆抗体，本发明还公开了一种杂交瘤细胞，用于分泌流产嗜性衣原体MIP蛋白的单克隆抗体，该杂交瘤细胞采用下述方法制备：

1)通过人工合成或者原核表达获得流产嗜性衣原体MIP蛋白，其具有序列表1所示的氨基酸序列；

2)注射流产嗜性衣原体MIP蛋白免疫小鼠，免疫完成后从小鼠采集血样检测抗体效价，选择效价数量级不低于10⁷的小鼠注射加强免疫；

3)在无菌条件下取上述免疫后的小鼠脾脏，制备脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的悬液，在融合剂作用下进行融合；

4)将融合细胞用HAT选择性培养基悬浮均匀并加入到铺有饲养细胞的细胞板中，在5％CO₂培养箱内培养；

5)融合细胞克隆生长完成后，对所有有克隆生长的培养上清进行检测，多次筛选和克隆化培养后得到分泌流产嗜性衣原体MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。

优选的，所述MIP蛋白的氨基末端或梭基末端连接有6×His标签。

在上述中，所用小鼠为BALB/c小鼠。

在上述中，饲养细胞是小鼠原代腹腔巨噬细胞。

在上述中，步骤2)免疫注射方式为腹部多点皮下注射或抗原液腹腔注射。