[发明专利]阿霉素脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药品技术领域，尤其涉及一种阿霉素脂质体的制备方法。

背景技术

脂质体由于具有良好的靶向性、缓释性、细胞亲和性等优点，已广泛用于抗肿瘤药物、抗寄生虫药物、抗结核、抗菌药物、激素类、蛋白多肽以及基因治疗药物等的载体。然而由磷脂和胆固醇组成的脂质体为热力学不稳定体系，在体内外的稳定性很差。为此，近年来很多学者采用各种高聚物来修饰脂质体以提高其稳定性，取得了良好的效果。拟采用维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯（TPGS）来修饰脂质体，考察其对阿霉素脂质体理化性能的影响。TPGS是一种维生素E的水溶性衍生物，由维生素E琥珀酸和聚乙二醇酯化而成，是一种性能优良的非离子型表面活性剂，在制剂中可作为增溶剂、吸收促进剂、乳化剂、增塑剂以及固体分散体的载体对P-gp有抑制作用，可有效地逆转肿瘤细胞的多药耐药性，已广泛用于抗肿瘤药物的传递系统中。

但这类材料存在制备困难：且产量低，并且制备药力无法掌控的缺点。严重限制了其临床应用和工业化生产。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提供一种克服材料在释药动力学上的缺限的一种阿霉素脂质体的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

阿霉素脂质体的制备方法，包括下步骤。

（1）精密称取卵磷脂400mg，TPGS200mg，胆固醇100mg，用20mL乙醇超声溶解，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，加入0.3M硫酸铵溶液10mL，剧烈震摇使膜脱落，50℃水化2h，冰浴下用细胞破碎仪探头超声200次，室温冷却并放置4h后，转移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室温透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀释至25mL，与2mg·mL-1盐酸阿霉素的10%蔗糖溶液等体积混合，40℃孵育1.5h，即制得含TPGS修饰的阿霉素脂质体。

（2）精密吸取0.750，0.625，0.500，0.375，0.250，0.125mL盐酸阿霉素标准贮备液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇（含0.1MHCl）至刻度，配成浓度分别为30，25，20，标准溶液，以80%酸性乙醇为空白，在495nm处测其吸光度。

（3）精密吸取1mg·mL-1盐酸阿霉素标准贮备液，并加入0.5mL空白脂质体，用酸性乙醇溶液溶解稀释成10，20，30μg·mL-1溶液，每一浓度配制3份，以酸性乙醇溶液为空白，在495nm测定吸收度。

（4）取制备的阿霉素脂质体用激光粒度测定仪测定其粒径分布和Zeta电位，测定条件和参数。

作为一种优选方案，取脂质体滴加于铜网上，用滤纸从铜网边缘吸去多余液体，滴加3%的磷钨酸溶液进行负染，吸干负染液，自然风干，置于透射电镜下观察脂质体的形态。

本发明有益效果。

本发明本研究过程中还发现外水相介质对阿霉素脂质体的稳定性有较大的影响，当选用pH7.4的HBS作为外水相介质时，一星期内的泄漏率超过40%，而用10%蔗糖作为外水相时，其渗漏率大大减小，这可能是与蔗糖溶液的粘度，密度,“水置换”等作用有关。另外蔗糖可作为脂质体的冻干保护剂,可将制得的脂质体直接冻干，而无需加入其它保护剂，减少冻干添加剂对脂质体性能的影响。

具体实施方式阿霉素脂质体的制备方法，包括下步骤。

（1）精密称取卵磷脂400mg，TPGS200mg，胆固醇100mg，用20mL乙醇超声溶解，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，加入0.3M硫酸铵溶液10mL，剧烈震摇使膜脱落，50℃水化2h，冰浴下用细胞破碎仪探头超声200次，室温冷却并放置4h后，转移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室温透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀释至25mL，与2mg·mL-1盐酸阿霉素的10%蔗糖溶液等体积混合，40℃孵育1.5h，即制得含TPGS修饰的阿霉素脂质体。

（2）精密吸取0.750，0.625，0.500，0.375，0.250，0.125mL盐酸阿霉素标准贮备液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇（含0.1MHCl）至刻度，配成浓度分别为30，25，20，标准溶液，以80%酸性乙醇为空白，在495nm处测其吸光度。