[发明专利]一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法

说明书

 

技术领域    

本发明涉及一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法，属于苗木无性快速繁殖组织培养技术领域。

背景技术    

白木乌桕[Sapium japonicum (Sieb. et Zucc.) Pax et Hoffm.]为大戟科乌桕属山乌桕同属近缘植物，种子较山乌桕大而不具白色蜡质假种皮，为野生油脂植物。株高1～8 m，花期5～6月，种子扁球形，11月成熟，直径6～9 mm。种植2～3年即可结籽5～10 kg，5年进入盛产期，平均结籽50多kg，最高可产300 kg，为不可多得的具有较好开发价值的重要能源树种，但限于对该生物质能源树种栽培技术掌握不够，致使白木乌桕仍处于野生状态。白木乌桕的开发利用，将丰富能源树种家族成员，对促进生物质能产业发展具有重要意义。

白木乌桕育苗多采用种子繁殖，但种质资源长期处于野生状态，种子产量低，且种子存在当年和翌年萌发的2年萌发现象，对种苗培育掌控和管理均存在重大难题，然而目前扦插、嫁接等无性繁殖技术不成熟，因此，白木乌桕种苗培育成为人工林培育瓶颈之一。

发明内容    

本发明的目的是，针对目前白木乌桕种子产量低、萌发周期长，以及扦插和嫁接繁殖技术不成熟，难以满足大规模种植种苗需求的问题，提供一种直接通过嫩枝茎段诱导再生植株的方法。

实现本发明的技术方案是，本发明包括白木乌桕的外植体培养、外植体处理、不定芽诱导、不定芽继代增殖、不定芽生根、整床及基质配制和驯化移栽。

本发明白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法步骤如下：

（1）外植体培养：2月中上旬，在树液开始流动，但芽尚未萌动时，在苗圃地里选取2～4年生的白木乌桕优良母株，剪取健康枝条，用流水冲洗干净后，在白天培养温度（27±2）℃、夜间培养温度（23±2）℃，光照强度2 000 Lx，光照12 h/d的培养室进行水培复幼。水培营养液配方为：四水硝酸钙150 mg/L、硝酸钾80 mg/L、硝酸铵15 mg/L、磷酸二氢钾20 mg/L、硫酸镁80 mg/L。每3天更换一次营养液，约15天后用新长出的嫩枝作为外植体。

（2）外植体处理：将嫩枝先剪去新叶（保留叶柄0.1～0.2 mm），再剪成5～8 cm茎段；放入流水中冲洗30 min，在无菌条件下，用0.1% HgCl₂磁力搅拌5 min，无菌水磁力搅拌5次，每次2 min；然后将消毒后的茎段再切割成1～2 cm带1个腋芽的茎段作为接种外植体，其中接种外植体形态学上端为平切，下端为45度斜切。

（3）不定芽诱导：将接种外植体垂直插入诱导分化培养基WPM + 6-BA 1.2 mg/L + NAA 0.15 mg/L + 硝酸银2.0 mg/L，培养基内加白糖4.5%以及0.7%琼脂，pH为5.8；接种后先暗培养5天，然后转入光照培养25～30天，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间13小时，光强为2000～2500 Lx，产生不定芽。 

（4）不定芽继代增殖：将产生的不定芽切下后转接到增殖与继代培养基WPM + 6-BA 1.2 mg/L + KT 0.25 mg/L + GA₃ 0.5 mg/L，使用透气封口膜封口，培养基内添加白糖5.5%以及0.75%琼脂，pH为5.8，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间13小时，光强为2000～2500 Lx，培养30～35 天，增殖出原来6～8倍的不定芽。 

（5）不定芽生根：把转接后获得的大于2 cm高的不定芽切下转至生根培养基?MS + NAA 0.8 mg/L + IBA 0.2 mg/L + Critric acid 80 mg/L，培养基内添加白糖5.5%以及0.75%琼脂，pH为5.8，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间15小时，光强为4000～5000 Lx，得到生根苗。 

（6）整床及基质配制：将移栽床面整平踏实后，床宽80 cm，沟面宽30 cm，深10 cm，用3%的硫酸亚铁溶液喷洒后，将口径为6 cm、高度10 cm的有底蜂窝育苗容器铺在床面上，装入混合基质。混合基质由砻糠灰：泥炭：河沙=1:2:1混匀配置而成。