[发明专利]一种毛茛铁线莲组培快繁的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组培快繁的方法，尤其是一种毛茛铁线莲组培快繁的方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

毛茛铁线莲（Clematis ranunculoides Franch.）为毛茛科草质藤本植物，分布于我国西南地区。花朵密集，紫红色，花期9月至10月，正值国庆中秋开放，具有较高观赏性，可作为盆栽花卉或攀援绿化植物。同时，全草入药，可治疗多种疾病。因此，毛茛铁线莲是极具开发价值的药用观赏植物。

然而，现有技术中，毛茛铁线莲多为自然生长繁育，尚未见到公开报道有关毛茛铁线莲组培快繁的方法。若要高效、快速得到这一具有药用价值的毛茛铁线莲，有必要研发毛茛铁线莲组培快繁的技术，以实现毛茛铁线莲育苗周期短，快速得到毛茛铁线莲植株，同时保持母本优良性状等优点。

发明内容

为解决毛茛铁线莲的自然繁育周期长，难以适应药用需求，本发明提供一种毛茛铁线莲组培快繁的方法，以实现毛茛铁线莲的育苗周期短，使人们能快速得到毛茛铁线莲植株。

本发明通过下列技术方案完成：一种毛茛铁线莲组培快繁的方法，其特征在于经过下列各步骤：

（1）切取毛茛铁线莲的嫩芽，用水冲洗1h，再依次用体积浓度为75%的乙醇浸泡25～35s、用浓度为1‰的升汞浸泡5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次后吸干表面水分，取嫩芽基部切成1cm，再接种于芽诱导培养基上：MS+6-BA 1.5～2.5mg/L+NAA 0.4～0.6mg/L+AgNO₃ 2.5～3.5mg/L，在温度为22～26℃、光照强度为1500～2000Lx、相对湿度为65～75%的条件下进行培养；

（2）待步骤（1）嫩芽的芽基部开始膨大并出现黄绿色突起时，再继续培养20～25天后出现明显的愈伤组织，然后继续培养30～35天，直至愈伤组织长出小芽；

（3）切下步骤（2）带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上：MS+BA 1.5～2.5mg/L+NAA 0.04～0.06mg/L，在温度为22～26℃、光照强度为1500～2000Lx、相对湿度为65～75%的条件下进行培养，使不定芽增殖，直至不定芽长到2～3cm；

（4）取步骤（3）高为2～3cm、生长健壮的不定芽植株，将其转接入生根培养基中：1/2MS+IBA 0.4～0.6mg/L+NAA 0.9～1.1mg/L+AC 0.1～0.25g/L，在温度为22～26℃、光照强度为1500～2000Lx、相对湿度为65～75%的条件下进行诱导生根，30天后植株幼苗的基部分化出白色的根原基，直至根原基长至3～5cm，得到生根苗；

（5）取步骤（４）生长健壮的生根瓶苗于室内揭开封口膜过渡3～8天，取出后洗净根部，移栽于大棚中驯化25～35天，然后再移栽至室外并给予适当肥水管理，即得到毛茛铁线莲植株。

本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：本方法能快速繁殖毛茛铁线莲，育苗周期短，能快速得到毛茛铁线莲植株，成活率高达90%以上，繁殖系数高，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，可在短期内形成大量优良试管苗，可进行规模化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

（1）切取毛茛铁线莲的嫩芽，用水冲洗1h，在超净工作台上依次用体积浓度为75%的乙醇浸泡25s、用浓度为1‰的升汞浸泡5min，然后用无菌水冲洗3次后吸干表面水分，取嫩芽基部切成1cm，污染率为92%，再接种于芽诱导培养基上：MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L+AgNO₃ 3mg/L，在温度为24℃、光照强度为1500Lx、相对湿度为70%的条件下进行培养；

（2）待步骤（1）嫩芽的芽基部开始膨大并出现黄绿色突起时，再继续培养20天后出现明显的愈伤组织，然后继续培养30天，直至愈伤组织长出小芽，诱导率64%；

（3）切下步骤（2）带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上：MS+BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L，在温度为26℃、光照强度为1800Lx、相对湿度为75%的条件下进行培养，使不定芽增殖，直至不定芽长到2～3cm，20d的增殖率为6.8倍；