[发明专利]美洲大蠊总蛋白的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及美洲大蠊总蛋白的提取方法。

背景技术

美洲大蠊(Periplaneta americana Linnaeus)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫。已有研究指出经提取、纯化而得的美洲大蠊蛋白具有良好的对抗四氯化碳所致小鼠急性肝损伤作用，本研究前期工作基础亦证实美洲大蠊的水闪式提取物药效明显，提示了闪式提取法应用于该活性部位制备过程的潜质，因此本研究拟以总蛋白含量为指标，对闪式提取法与传统提取方法展开比较，并应用闪式提取法对提取工艺进行单因素考察，以确定主要因素与水平，继而采用正交设计法优选闪式提取工艺，为动物药蛋白类热不稳定活性成分的提取建立技术平台。

中国专利申请：CN 103083363 A，公开了美洲大蠊提取物的制备方法，它是采用闪式提取方法进行提取的，其中，出膏率平均为47.59％，蛋白质含量可以达到约15mg/g。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取效果更优异的美洲大蠊总蛋白的提取方法。

本发明提供了美洲大蠊总蛋白的提取方法，它包括如下操作步骤：

取美洲大蠊，粉碎，以水为溶剂，于25～55℃下以闪式提取1～3次，每次加水10～22倍量，1～3min/次，提取电压为50～110V，水的pH为6～10。

进一步地，提取温度为45～55℃，优选为45℃。

进一步地，闪式提取为1min/次，提取电压70V。

优选地，提取次数为3次。

进一步地，每次加水量为16～20倍。

优选地，每次加水量为20倍。

中国专利申请：CN 103083363 A中，并未提及任何关于溶剂pH与提取效果之间的关联。然而，本发明在研究中意外地发现，提取溶剂的pH对提取效果也有显著影响，因此，本发明中还对溶剂pH进行了考察：

进一步地，水的pH为8.3～9.3。在此条件下，提取效果优于纯水。

优选地，水的pH为8.8。

本发明通过对提取方法的筛选，最终得到了美洲大蠊的最佳闪式提取方法，能够保证较高的蛋白质收率基础上，缩短提取时间，为工业化大生产提供了可能。

本发明经实验验证，所得美洲大蠊闪式提取物中总蛋白质的含量和出膏率均明显优于专利号CN 103083363 A的专利公开方法所制备的美洲大蠊闪式提取样品。

具体实施方式

实施例1  本发明提取方法

取美洲大蠊药材，粉碎，以水溶溶剂，于45℃下以闪式提取3次，每次加水20倍量，1min/次，提取电压为70V，水的pH为9.3。

实施例2  本发明提取方法

取美洲大蠊药材，粉碎，以水溶溶剂，于45℃下以闪式提取3次，每次加水20倍量，1min/次，提取电压为70V，水的pH为8.8。

实施例3  提取方法的筛选

1  材料

美洲大蠊药材(购自云南腾冲，经生药教研室卢先明教授鉴定为蜚蠊科大蠊属昆虫美洲大蠊Periplaneta americana L.),考马斯亮蓝G250(成都市科龙化工试剂厂，批号20120924)。

JHBE-50T型闪式提取器(河南金鼐科技发展有限公司)，UV-1700型紫外-可见分光光度计(岛津制作所分析计测事业部)。

2  方法与结果

2.1  总蛋白含量测定方法

2.1.1  供试品溶液的制备方法

取药材适量，按各法提取，合并滤液。2.3项下滤液定容至500mL，作为储备液，精密吸取水提储备液8mL定容至25mL，作为供试品溶液；2.4项下滤液定容至1000mL，作为储备液，精密吸取水提储备液5或10mL定容至25mL，作为供试品溶液。

2.1.2  标准曲线的建立

以A₅₉₅为纵坐标，BSA浓度为横坐标，回归方程为y＝0.0041x+0.1500(r＝0.9995)，在30.69～153.45μg，其浓度与吸光度之间线性关系良好。

2.1.3  供试品溶液含量测定

精密吸取供试品液各1mL，按2.4.2显色，测定A₅₉₅。通过标准曲线计算总蛋白含量。

2.2  出膏率测定

按照2.1.1项下方法制备储备液，各取100mL置蒸发皿中，水浴挥干，105℃常压干燥至恒重，称定质量，计算出膏率。