[发明专利]一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法

权利要求书

1.一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法，其特征在于：是采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理，样品经McIlvaine缓冲液-乙腈提取，提取液酸化、盐析，取少量乙腈相，用C18和NH₂吸附剂分散固相萃取净化，净化液浓缩、定容，采用超高效液相色谱-串联质谱法即UPLC-MS/MS进行测定的方法；具体步骤如下：

a、准确称取匀浆好的样品2.00g，精确至0.01g，于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入2mL0.1mol/LNa₂EDTA-McIlvaine缓冲液，3mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，收集提取液于另一50mL离心管中；

b、残渣加入5mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，合并提取液；

c、于提取液中依次加入200μL冰乙酸，1.0g氯化钠，于旋涡混合器上涡旋1min，4000转/min，离心5min，取2mL上层乙腈相于10mL聚丙烯塑料离心管中；

d、分别加入100mgC18和100mgNH₂吸附剂，涡旋1min，4000转/min，离心5min，上清液于40℃条件下氮气吹干，残渣加1mL甲醇-0.1％甲酸水定容，过0.22μm有机滤膜，待测；所述甲醇与0.1％甲酸水的体积比为10:90；

e、准备标准工作溶液：分别称取各标准品适量，磺胺类兽药用乙腈溶解并定容，金刚烷胺用1％甲酸乙腈溶解并定容，喹诺酮类兽药用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解，甲醇定容，配制成浓度均为100μg/mL的标准储备液，于4℃条件下保存，分别吸取29种兽药标准储备液0.25mL于25mL容量瓶，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为1.0μg/mL的混合标准工作液，于4℃条件下保存，可使用一个月；

f、准备基质匹配标准溶液：对空白鸡肉样品按相同前处理方式处理，定容得到空白样品基质溶液；分别取适量混合标准工作溶液，氮气吹干，用空白样品基质溶液溶解，配制浓度为2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的系列基质匹配标准溶液；

g、采用UPLC-MS/MS法对基质匹配标准溶液和供试样品进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标兽药的残留量；

采用的色谱条件为：C18反相色谱柱，流动相由有机相和水相组成，有机相是甲醇、乙腈，水相是水、甲酸水，采用梯度洗脱，流速0.2mL/min，柱温30-40℃，进样体积5-10μL；采用的质谱条件为：电喷雾正离子电离ESI+，多反应监测扫描，毛细管电压：3.0Kv；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：350-400℃；锥孔电压10-90V，碰撞能量10-90V。

2.根据权利要求1所述的一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法，其中的样品为经组织匀浆机匀浆好的鸡肉、鸡肝、猪肉和猪肝样品。

3.根据权利要求1所述的一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法，其中四类29种兽药分别是金刚烷胺，四环素类4种，所述4种四环素类为四环素、土霉素、金霉素、强力霉素，磺胺类14种，所述14种磺胺类为磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉，喹诺酮类10种，所述10种喹诺酮类为麻保沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、单诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、恶喹酸、氟甲喹。

4.根据权利要求1所述的一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法，其中0.1mol/LNa₂EDTA-McIlvaine缓冲液pH值为4.0，其配制方法为：准确称取12.9g柠檬酸，所述柠檬酸为C₆H₈O₇·H₂O，10.9g磷酸氢二钠，所述磷酸氢二钠为Na₂HPO₃·12H₂O，37.2gNa₂EDTA·2H₂O，加超纯水900mL溶解，用1mol/LNaOH调pH值至3.8，加超纯水稀释至1000mL。