[发明专利]液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体为一种在医学检验中使用的稳定性好的液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒。 

背景技术

同型半胱氨酸(Hcy)是独立的心脑血管疾病最新监测指标，可用于预测脑血管疾病发生的危险性，并与老年痴呆、肾功能衰竭、流产及糖尿病早亡有关，所以Hcy的体外检测具有重要的临床价值。 

目前检测血浆中Hcy主要采用酶循环法，该法可以在自动生化分析仪上进行，测定灵敏度高，广泛应用于临床检验。其反应原理如下： 

L-Met：L-甲硫氨酸 

SAMT：S-腺苷甲硫氨酸转移酶(水杨酸羧基位甲基转移酶) 

SAH：S-腺苷同型半胱氨酸 

SAHH：S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 

ADA：腺苷脱氨酶 

α-KG：α-酮戊二酸 

GLDH：谷氨酸脱氢酶。 

目前酶法试剂盒虽在临床上应用广泛，但由于其底物SAM(S-腺苷甲硫氨酸,S-腺苷-L-蛋氨酸)本身的稳定性差，所采用的偶联酶热稳定性不好等多种原因，导致试剂盒在临床上的应用受限。 

发明内容

本发明为了解决上述问题，提供一套S-腺苷基甲硫氨酸及还原型辅酶Ⅰ(NADH)的稳定体系，并引入专利酶技术以提高试剂盒的整体稳定性，从而满足临床检验的需求的液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒。 

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒，该试剂盒包括：1)稳定的底物系统，包括NADH循环系统与S-腺苷甲硫氨酸(SAM)聚阴离子系统；2)稳定的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶，提高试剂盒整体的稳定性。 

本发明上述的NADH循环系统在液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒中的各组分和用量如下： 

NADH          0.1-0.5g/L， 

葡萄糖脱氢酶  5-50KU/L， 

D-葡萄糖      10-100mM。 

本发明上述NADH循环系统的采用，其作用在于：试剂在放置的过程中，由于NADH容易受光、热等影响，分解成NAD，从而导致试剂盒性能的下降，而通过引入以下循环反应从而确保试剂盒中NADH的含量满足测定的需求： 

其中NAD为试剂盒放置过程中所生成，而D-葡萄糖/葡萄糖脱氢酶则是为了满足NADH的循环所加入的成分，均有市售。 

本发明上述S-腺苷甲硫氨酸聚阴离子系统在液体稳定酶法同型半胱氨酸试剂盒中的各组分和用量如下： 

SAM聚阴离子(SAM聚阴离子是指SAM与大分子量的聚阴离子通过静电作用结合形成的盐)          1-30mM； 

环糊精类：  1-30mM； 

多糖：      1-200g/L。 

本发明一种稳定的底物系统——SAM底物系统，由SAM聚阴离子(聚阴离子SAM盐)及环糊精组成。常见的SAM盐有钾盐、钠盐、对甲苯磺酸硫酸盐等，但均由于SAM非常活泼，很容易分解成多种物质，故试剂盒的稳定性受限。因为，不同的阴离子对SAM盐的稳定性不同，提高阴离子的空间立体障碍可增加其稳定性。大分子量的阴离子通过静电作用与SAM结合,利用其空间位阻限制SAM氨基酸链的自由旋转,从而提高SAM的稳定性；本发明通过筛选发现水溶性聚阴离子具体指含-SO₃^-(聚乙烯磺酸盐、聚苯乙烯磺酸盐如钠盐、钾盐等)、-SO₄^-(聚乙烯硫酸盐如钠盐、钾盐等)、-O-PO₃^2-以及-O-PO₃H^-(聚乙烯磷酸盐如钠盐、钾盐等)等重复单元的强酸衍生型聚阴离子和含-COO^-重复单元的弱酸衍生型聚阴离子可以显著提高SAM的稳定性。聚合物的重复单位(重复单元)为3-20，重复单位低，则稳定性差，而重复单位过高，则对反应产生抑制作用。 

本发明上述的SAM聚阴离子具体是SAM与大分子量的聚阴离子通过静电作用结合得到的盐，为行业常规技术，具体SAM与大分子量的聚阴离子通过静电作用获得盐的方法可参考CN85107218中具体实施例。 

但是仅有聚阴离子SAM是不能满足试剂盒的长期稳定性的，另需加入一些稳定剂，稳定剂主要包括环糊精类与多糖类的一种或者多种组合。