[发明专利]一种分离培养兔骨髓间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种分离培养兔骨髓间充质干细胞的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)从兔骨髓腔内分离出完整的骨髓栓，并采用胶原酶消化；

(2)将消化后释放出的造血细胞丢弃，将消化后的骨髓栓种于培养基中培养；

(3)首次全量换液，并去除骨髓栓，保留从骨髓栓中迁移出的间充质干细胞，然后每隔两天半量换液，培养3～15天，即可得到大量兔骨髓间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分离骨髓栓的方法为：取2～20周龄健康新西兰白兔，空气栓塞处死，用75％酒精浸泡3～5分钟后，无菌条件下分离兔股骨和胫骨，去净表面组织，以剪刀和镊子去除股骨和胫骨的两端，沿长骨长轴剪开骨髓腔，以镊子分离出完整的骨髓栓。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将骨髓栓置于重量百分浓度为0.1～0.15％、溶剂为含有15％～20％体积胎牛血清的α-MEM培养基的胶原酶溶液中进行消化。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消化的条件为：在35～38℃、5％CO₂条件下消化0.5～1小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中将骨髓栓在35～38℃、5％CO₂条件下培养24～72小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中培养条件为：在35～38℃、5％CO₂条件下。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2，3)所用培养基为含有1～2mmol/L谷氨酰胺，10～15％体积胎牛血清的α-MEM培养基。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当间充质干细胞长满70～80％培养瓶面积后消化传代，连续传代，取第4～6代细胞进一步研究或使用。