[发明专利]一种用于胸腺肽制剂活力检测中动物胸腺脱E受体胸腺T细胞的提取方法有效
| 申请号： | 201410381651.X | 申请日： | 2014-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN105316289B | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 刘思川;逯佩荣;刘菊;彭朝晖;李全学;龚丽萍;宁彰艳;方远征;付琴;牛亚飞 | 申请（专利权）人： | 湖南科伦制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 414100 湖南省岳阳*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞悬液 胸腺 动物胸腺 胸腺细胞 上清液 淋巴细胞 淋巴细胞分离液 胸腺肽制剂 后处理 活力检测 细胞提取 中间层 过滤 | ||
1.一种脱E受体胸腺T细胞的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
取动物胸腺与Hank’s液混合，获得第一细胞悬液，过滤，获得滤液，经第一离心，弃去上清液，获得第一沉淀物；
取所述第一沉淀物与Hank’s液混合，获得第二细胞悬液，取淋巴细胞分离液与所述第二细胞悬液混合，经第二离心，取中间层液体，获得胸腺细胞；
取所述胸腺细胞与Hank’s液混合，获得第三细胞悬液，经第三离心，弃去上清液，再经后处理，即得；
所述第一离心具体为2000～2500转/分钟离心3～5分钟；
所述第二离心具体为3000～3500转/分钟离心20～30分钟；
所述第三离心具体为3000～3500转/分钟离心3～5分钟。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，第一离心为2000转/分钟离心5分钟。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，第二离心具体为3000转/分钟离心20分钟。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，第三离心具体为3000转/分钟离心5分钟。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述后处理具体为：洗涤，与Hank’s液混合，于40～50℃条件下保温20～40min。
6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，以g/mL计，所述胸腺与所述Hank’s液的质量体积比为2:1。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述过滤的目数为100目。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述淋巴细胞分离液与所述第二细胞悬液的体积比为1:3。
9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述动物胸腺为猪胸腺或小牛胸腺。
10.如权利要求1至9所述的提取方法在胸腺肽活力检测中的应用。
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